ELISA檢測(cè)    

一、實(shí)驗(yàn)介紹

　　酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定enzyme linked immunosorbent assay（簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理

　　ELISA目的是檢測(cè)血清、尿液、細(xì)胞上清等液體中特定的抗原，以達(dá)到定性判斷的目的。

　　ELISA原理即將已知的抗原或者抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。示意圖如下：

三、實(shí)驗(yàn)步驟

　　實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

　　1.將酶標(biāo)板取出，分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)依次各設(shè)兩孔，每孔加入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中加入待測(cè)樣本10μL，再加入樣本稀釋液40μL（樣本稀釋5倍）。（加樣順序及相應(yīng)編號(hào)見excel表中相關(guān)內(nèi)容！）

　　2.棄去液體，將洗液工作液按350μL/每孔注入孔內(nèi)，靜置10s甩干，重復(fù)洗板5次，在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

　　3.每孔中加入檢測(cè)抗體50μL（在使用簽10分鐘內(nèi)配制），充分混勻，貼上不干膠封面，37℃溫育30分鐘。

　　4.重復(fù)步驟2。

　　5.每孔加顯色劑A 50μL，顯色劑B 50μL，振蕩混勻后，37℃避光顯色10分鐘，每孔加終止液50μL。

　　6.用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)檢測(cè)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。

　　7.實(shí)驗(yàn)完畢后，未使用完的試劑按規(guī)定保存溫度放回冰箱保存。

四、典型數(shù)據(jù)展示

由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同，標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會(huì)有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，如下本實(shí)驗(yàn)室建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

五、送樣運(yùn)輸要求：

　　血清、血漿或其他液體樣本：100μl檢測(cè)一個(gè)指標(biāo)；

　　未經(jīng)分離處理的樣本，例如全血1ml大約可分離100-200μl血清，但是必須根據(jù)客戶實(shí)際送樣情況而定，全血樣本4℃保存送檢，其余液體樣本-20℃凍存送檢。

　　組織：樣本至少0.1g（黃豆大小），最后能勻漿分離上清液500μl左右，可檢測(cè)5個(gè)指標(biāo)，-20℃凍存送檢。