磁珠法核酸提取技術(shù)是以納米生物磁珠為載體的一種新型核酸提取技術(shù)，核酸分子可與磁珠表面的硅羥基發(fā)生特異性識(shí)別與結(jié)合，在外部磁場(chǎng)的作用下發(fā)生聚集或分散，徹(空)底擺脫傳統(tǒng)核酸提取過程中離心、抽取上清液等手工操作流程，從而實(shí)現(xiàn)核酸提取純化的方法。目前所使用的磁珠大多數(shù)都是“核-殼”結(jié)構(gòu)，都是以具有超順磁性的納米微粒作為“核”，再在核的表面包裹上一層高分子有機(jī)化合物和一層功能基層作為“殼”，在溶液中有較好的懸浮性。在磁場(chǎng)中被磁化，在磁力的作用下聚集，極易與不具有磁性的物質(zhì)分離開來，操作過程中無需離心等操作。

磁珠粒徑選擇？

粒徑較大的磁珠，磁響應(yīng)性比較大，捕獲小片段核酸的能力大一點(diǎn)。粒徑較小的磁珠，磁響應(yīng)性比較小，捕獲大片段核酸能力大一點(diǎn)。

上海惠誠生物提供6um超順磁硅羥基磁珠(Cat No. HA21015)，濃度：120mg/mL; 40s磁響應(yīng)(%):＞90%；600s磁響應(yīng)(%):100%。

什么是磁分離?

磁分離利用磁場(chǎng)將微米大小的順磁顆粒從懸浮液中分離出來。在分子生物學(xué)中，磁珠提供了一種簡(jiǎn)單可靠的純化各種類型生物分子的方法，包括基因組DNA、質(zhì)粒、線粒體DNA、RNA和蛋白質(zhì)。

例如，在優(yōu)化條件下，DNA選擇性地結(jié)合到適當(dāng)涂層的珠表面，將污染物留在溶液中。然后，你可以直接在分子生物學(xué)應(yīng)用中使用這種純化的DNA。

使用磁珠的一個(gè)關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)是，你可以直接從原始樣品中分離出核酸和其他生物分子，以及從各種不同類型的樣品中分離出核酸和其他生物分子，只需很少的處理。這將磁珠與其他核酸分離方法區(qū)別開來，其他方法可能對(duì)不同類型的樣本有不同的方案，并且需要更多的動(dòng)手時(shí)間。

磁力架

磁力架提供了一種快速簡(jiǎn)單的方法來純化特定的蛋白質(zhì)，核酸和其他生物分子。利用磁珠將目標(biāo)生物分子從生物樣品中分離出來。對(duì)樣品混合物施加磁力，被磁珠吸引的感興趣分子從混合物中分離出來。磁分離技術(shù)在DNA和mRNA純化、細(xì)胞分離、蛋白質(zhì)純化等方面有廣泛的應(yīng)用。上海惠誠生物提供50毫升磁力架，具有強(qiáng)大的，可移動(dòng)的磁力和易于移液管訪問。它有助于從各種液體樣品介質(zhì)中捕獲、保留和釋放磁珠，允許多達(dá)6個(gè)50mL樣品的高通量并行處理。

磁珠法核酸提取由裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫等步驟組成，不同廠家生產(chǎn)的磁珠法核酸提取試劑有所不同，主要體現(xiàn)在：（1）磁珠大小不同；（2）磁珠修飾方式不同；（3）洗滌方式不同；（4）樣本量不同。

磁珠法如何提取DNA?

磁珠法提取DNA依賴于使用帶有涂層的磁珠，只需調(diào)整緩沖條件就可以可逆地結(jié)合核酸。

核酸提取步驟

1. 樣品準(zhǔn)備

a) 過夜培養(yǎng)的菌液，轉(zhuǎn)移至50 mL離心管，在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000 rpm離心10 min，盡棄上清。

b) 將5 mL P1 Buffer（已加入RNaseA酶溶液）加入至50 mL離心管，菌體充分懸浮。

c) 加5 mL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中，緩慢搖動(dòng)混合均勻（不能劇烈震蕩），進(jìn)行裂解。操作時(shí)間不能超過5min，防止基因組污染。

d) 再向裂解體系中加入7 mL P3 Buffer，緩慢搖動(dòng)混合均勻（不能劇烈震蕩），出現(xiàn)絮狀物沉淀。

e) 將中和后的50 mL離心管在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000 rpm離心20 min。

f) 取出離心后的50 mL離心管，轉(zhuǎn)移14 mL上清至新的50 mL離心管中。

2. 質(zhì)粒抽提

a) 添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL離心管中，完成后再加入16.5 mL的Binding buffer（已加無水乙醇）至新的50 mL離心管中。

b) 放置旋轉(zhuǎn)架上，孵育10 min。

c) 放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。

d) 加入30 mL Wash buffer（已加無水乙醇）至新的50 mL離心管中，放置旋轉(zhuǎn)架上，孵育1 min。重復(fù)一次。

e) 放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。

f) 放置37℃培養(yǎng)箱 10 min，直到磁珠中酒精蒸發(fā)完(空)全。

g) 加入500-1mL無菌水溶解，孵育3-5 min。

h) 放置磁力架上，靜置1-2 min，轉(zhuǎn)移上清之EP管中。

i) 使用分光光度計(jì)檢測(cè)A260。

【注意事項(xiàng)】

1. 試劑時(shí)間長(zhǎng)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置于常溫保存。

3. Buffer P1加入后一定要充分懸浮細(xì)菌，要保證看不到結(jié)塊的菌，否則細(xì)菌不易被裂解，質(zhì)粒產(chǎn)量會(huì)顯著下降。

4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水?。?7℃）加熱溶解，混勻后使用。

5. 基因組污染：Buffer P2和P3加入后輕輕搖晃，防止基因組斷裂。

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