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小片段核酸提取用超順磁硅羥基磁珠(6um,120mg/mL)

來源:上?;菡\生物科技有限公司   2024年10月14日 13:56  

磁珠法核酸提取技術(shù)是以納米生物磁珠為載體的一種新型核酸提取技術(shù),核酸分子可與磁珠表面的硅羥基發(fā)生特異性識別與結(jié)合,在外部磁場的作用下發(fā)生聚集或分散,徹(空)底擺脫傳統(tǒng)核酸提取過程中離心、抽取上清液等手工操作流程,從而實(shí)現(xiàn)核酸提取純化的方法。目前所使用的磁珠大多數(shù)都是“核-殼”結(jié)構(gòu),都是以具有超順磁性的納米微粒作為“核”,再在核的表面包裹上一層高分子有機(jī)化合物和一層功能基層作為“殼”,在溶液中有較好的懸浮性。在磁場中被磁化,在磁力的作用下聚集,極易與不具有磁性的物質(zhì)分離開來,操作過程中無需離心等操作。


磁珠粒徑選擇?

粒徑較大的磁珠,磁響應(yīng)性比較大,捕獲小片段核酸的能力大一點(diǎn)。粒徑較小的磁珠,磁響應(yīng)性比較小,捕獲大片段核酸能力大一點(diǎn)。


上?;菡\生物提供6um超順磁硅羥基磁珠(Cat No. HA21015),濃度:120mg/mL; 40s磁響應(yīng)(%):>90%;600s磁響應(yīng)(%):100%。


什么是磁分離?

磁分離利用磁場將微米大小的順磁顆粒從懸浮液中分離出來。在分子生物學(xué)中,磁珠提供了一種簡單可靠的純化各種類型生物分子的方法,包括基因組DNA、質(zhì)粒、線粒體DNA、RNA和蛋白質(zhì)。


例如,在優(yōu)化條件下,DNA選擇性地結(jié)合到適當(dāng)涂層的珠表面,將污染物留在溶液中。然后,你可以直接在分子生物學(xué)應(yīng)用中使用這種純化的DNA。


使用磁珠的一個(gè)關(guān)鍵優(yōu)勢是,你可以直接從原始樣品中分離出核酸和其他生物分子,以及從各種不同類型的樣品中分離出核酸和其他生物分子,只需很少的處理。這將磁珠與其他核酸分離方法區(qū)別開來,其他方法可能對不同類型的樣本有不同的方案,并且需要更多的動(dòng)手時(shí)間。


磁力架

磁力架提供了一種快速簡單的方法來純化特定的蛋白質(zhì),核酸和其他生物分子。利用磁珠將目標(biāo)生物分子從生物樣品中分離出來。對樣品混合物施加磁力,被磁珠吸引的感興趣分子從混合物中分離出來。磁分離技術(shù)在DNA和mRNA純化、細(xì)胞分離、蛋白質(zhì)純化等方面有廣泛的應(yīng)用。上海惠誠生物提供50毫升磁力架,具有強(qiáng)大的,可移動(dòng)的磁力和易于移液管訪問。它有助于從各種液體樣品介質(zhì)中捕獲、保留和釋放磁珠,允許多達(dá)6個(gè)50mL樣品的高通量并行處理。


磁珠法核酸提取由裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫等步驟組成,不同廠家生產(chǎn)的磁珠法核酸提取試劑有所不同,主要體現(xiàn)在:(1)磁珠大小不同;(2)磁珠修飾方式不同;(3)洗滌方式不同;(4)樣本量不同。


磁珠法如何提取DNA?

磁珠法提取DNA依賴于使用帶有涂層的磁珠,只需調(diào)整緩沖條件就可以可逆地結(jié)合核酸。

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核酸提取步驟

1. 樣品準(zhǔn)備

a) 過夜培養(yǎng)的菌液,轉(zhuǎn)移至50 mL離心管,在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000 rpm離心10 min,盡棄上清。

b) 將5 mL P1 Buffer(已加入RNaseA酶溶液)加入至50 mL離心管,菌體充分懸浮。

c) 加5 mL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中,緩慢搖動(dòng)混合均勻(不能劇烈震蕩),進(jìn)行裂解。操作時(shí)間不能超過5min,防止基因組污染。

d) 再向裂解體系中加入7 mL P3 Buffer,緩慢搖動(dòng)混合均勻(不能劇烈震蕩),出現(xiàn)絮狀物沉淀。

e) 將中和后的50 mL離心管在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000 rpm離心20 min。

f) 取出離心后的50 mL離心管,轉(zhuǎn)移14 mL上清至新的50 mL離心管中。


2. 質(zhì)粒抽提

a) 添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL離心管中,完成后再加入16.5 mL的Binding buffer(已加無水乙醇)至新的50 mL離心管中。

b) 放置旋轉(zhuǎn)架上,孵育10 min。

c) 放置磁力架上,靜置1-2 min,盡棄上清。

d) 加入30 mL Wash buffer(已加無水乙醇)至新的50 mL離心管中,放置旋轉(zhuǎn)架上,孵育1 min。重復(fù)一次。

e) 放置磁力架上,靜置1-2 min,盡棄上清。

f) 放置37℃培養(yǎng)箱 10 min,直到磁珠中酒精蒸發(fā)完(空)全。

g) 加入500-1mL無菌水溶解,孵育3-5 min。

h) 放置磁力架上,靜置1-2 min,轉(zhuǎn)移上清之EP管中。

i) 使用分光光度計(jì)檢測A260。


【注意事項(xiàng)】

1. 試劑時(shí)間長可能會(huì)出現(xiàn)沉淀,使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置于常溫保存。

3. Buffer P1加入后一定要充分懸浮細(xì)菌,要保證看不到結(jié)塊的菌,否則細(xì)菌不易被裂解,質(zhì)粒產(chǎn)量會(huì)顯著下降。

4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水?。?7℃)加熱溶解,混勻后使用。

5. 基因組污染:Buffer P2和P3加入后輕輕搖晃,防止基因組斷裂。


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