a. 樣品前處理

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會(huì)污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度，優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)擬用的流動(dòng)相或比它更弱的流動(dòng)相來(lái)制備樣品。除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性配件包，否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。

3. 如果樣品不溶于流動(dòng)相，請(qǐng)確保樣品、溶劑和流動(dòng)相可以混溶，以避免樣品和/或緩沖鹽析出。

4. 用0.2μm濾膜過(guò)濾樣品，去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇等），請(qǐng)確保濾膜材料不溶于該溶劑。請(qǐng)聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性。

或者，可以考慮在8000 rpm下離心樣品溶液20 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

5. 對(duì)于親水作用色譜(HILIC)分離，樣品必須用高百分比的有機(jī)溶劑制備（例如95%乙腈）。請(qǐng)參閱“BEH HILIC色譜柱入門”或“Amide色譜柱入門”章節(jié)獲取詳細(xì)信息。

b. pH范圍

  ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作pH范圍如下：采用BEH C18、BEH C8和BEH苯基填料為1~12；采用BEH Shield RP18和BEHAmide填料為2~11；采用BEH HILIC填料為1~9。表2列出了常用的緩沖鹽和添加劑。此外，柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖鹽類型和濃度而有所不同。例如，在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會(huì)縮短色譜柱壽命。

c. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能，請(qǐng)使用高品質(zhì)色譜級(jí)溶劑。所有水相緩沖鹽在使用前都應(yīng)使用0.2μm濾膜過(guò)濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過(guò)濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會(huì)堵塞色譜柱入口篩板，這會(huì)導(dǎo)致操作壓力增大，性能變差。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱第VI節(jié)。

d. 壓力

注：在壓力、pH和/或溫度的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

e. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率，ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作溫度范圍為20°C~90°C。在高pH條件下操作時(shí)，建議降低操作溫度以延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。在較高溫度下（如70 °C以上）運(yùn)行也可能縮短色譜柱使用壽命。在HILIC分析中，BEH Amide色譜柱可以在高pH值和高溫條件下使用，不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題（請(qǐng)參閱“BEH Amide色譜柱入門”章節(jié)的推薦條件）。

表2.使用ACQUITY BEH色譜柱時(shí)的推薦緩沖鹽