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通過(guò)對(duì)B9細(xì)胞的反復(fù)克隆，篩選出對(duì)IL-11高度敏感的B9-11細(xì)胞株，可用于IL11的檢測(cè)。
1．B9-11細(xì)胞的克隆 ①向96孔培養(yǎng)板中每孔加入100uL含5％FCS和100ng／mL rIL-11的PMI-1640培養(yǎng)液；②加B9-11細(xì)胞于每孔l、3、9和27個(gè)細(xì)胞，每一細(xì)胞濃度做一板，培養(yǎng)2周，陽(yáng)性生長(zhǎng)孔定期更換培養(yǎng)液和補(bǔ)充rIL-1③取出生長(zhǎng)較好孔內(nèi)細(xì)胞，測(cè)其對(duì)IL-11的敏感度，所需IL-11濃度zui低的細(xì)胞克隆為B9-11克隆。
2．在96孔板中每孔加50rtl用含5％FCSRPMI-1640系列稀釋的待測(cè)樣品和5X103B9-11細(xì)胞，每孔終體積為150$tL。5％c02 37~C溫箱中培養(yǎng)4d
3．加MTF溫育4h，加酸化異丙醇溶解甲臘，測(cè)630nm—5701an的吸光度值。IL-11活性以UTll65表示，即B9-11細(xì)胞發(fā)生50％zui大增殖時(shí)稀釋度的倒數(shù)除以30（因B9-11細(xì)胞對(duì)IL-11的敏感度為T1165細(xì)胞的30倍）。
4．注意事項(xiàng) 測(cè)定生物標(biāo)本應(yīng)加抗IL-6McAb以中和IL-6對(duì)結(jié)果的影響。
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