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小鼠游離皮質(zhì)培養(yǎng)試劑盒怎么使用?

來(lái)源:天津益元利康生物科技有限公司   2024年10月28日 15:07  

買(mǎi)到了BrainBits小鼠游離皮質(zhì)培養(yǎng)試劑盒后,該如何使用呢?

一、制劑(無(wú)菌罩室溫):

1. 80µl臺(tái)普蘭藍(lán)(Sigma T8154)加入0.5ml試管中進(jìn)行下面的步驟4

2. 12ml NbActiv1™至室溫。

3. 2ml分離的初級(jí)神經(jīng)元管置于30℃水浴中加熱1分鐘。

image.png

二、細(xì)胞分散(無(wú)菌罩室溫):

1. 用硅化巴斯德移液管,將整個(gè)試管的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無(wú)菌15ml離心管中。

2. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G)1分鐘。丟棄上清,留下約50µl含有微球的THRYVE胚胎wanquan液。

3. 分散細(xì)胞顆粒(用手指或管輕彈管底部),重懸于1ml NbActiv1™中。

4. 20µl細(xì)胞液加入含有80µl臺(tái)盼藍(lán)(1:5稀釋)的0.5ml試管中。

5. 使用血細(xì)胞計(jì)(計(jì)算細(xì)胞/ml)或使用當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室程序計(jì)數(shù)細(xì)胞。

三、細(xì)胞電鍍(無(wú)菌罩室溫):

1. NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細(xì)胞,用16000個(gè)細(xì)胞/cm2或所需濃度的平板。

2. 37℃,5% CO2, 9% O2, 95%濕度(或環(huán)境O2)孵育。

3. 4天后,神經(jīng)元顯示軸突和樹(shù)突;突觸和動(dòng)作電位開(kāi)始于7天。

4. 3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

四、細(xì)胞鍍96孔板:

1. NbActiv1™0.2ml/cm2稀釋細(xì)胞,并以10,000個(gè)細(xì)胞/孔(SD)和35,000個(gè)細(xì)胞/孔(C57/BL6)或所需的濃度進(jìn)行平板稀釋

濃度。

2. 將鋼板放在工作臺(tái)頂部(而不是在引擎蓋下),并將邊緣用薄膜包裹15-20分鐘,使其均勻沉降。

3. 除去副膜,37℃,5% CO2, 9% O2, 95%濕度(或環(huán)境O2)孵育。

4. 4天后,神經(jīng)元顯示軸突和樹(shù)突;突觸和動(dòng)作電位開(kāi)始于7天。

5. 3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

五、可行性分析:

1. 37℃HBSS 0.2ml/cm2底物)沖洗兩次。

2. 15mg/ml雙醋酸熒光素的丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶的水原液配制染料混合物。

將每種15µl稀釋到1.5ml HBSS中(1:100稀釋)。

3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物(1:10稀釋)。

4. 1分鐘后,使用適合熒光素?zé)晒獾乃{(lán)色激勵(lì)(綠色細(xì)胞)計(jì)數(shù)活細(xì)胞。計(jì)數(shù)死細(xì)胞

綠色激發(fā)為碘化丙啶熒光(小紅核)。

5. 生存能力=(綠色細(xì)胞/單位面積)/(總細(xì)胞數(shù)/單位面積)或生存=綠色細(xì)胞/(綠色+紅色細(xì)胞)。

除了BrainBits試劑盒外,如需BrainBits培養(yǎng)基也可以聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司!

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