本研究使用甲酸和乙腈梯度對堿性藥物化合物進行了分離。比較了兩種表面多孔顆粒填料 C18 色譜柱:表面帶電荷的 Agilent InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 和傳統(tǒng)的 C18 鍵合相色譜柱。使用簡單且普遍適用的甲酸流動相時,這些堿性分析物在帶電荷表面色譜柱上獲得的峰形優(yōu)于傳統(tǒng) C18 柱。傳統(tǒng) C18 色譜柱需要使用不太理想的三氟乙酸流動相來改善峰形。進一步的研究表明,帶電荷表面色譜柱還提高了堿性分析物的載樣量,能夠改善雜質分析的檢測限。

Poroshell 120 CS-C18 色譜柱將表面多孔型雜化顆粒與表面電荷技術相結合,既保留了高效低壓的優(yōu)勢,又能耐受廣泛的 pH 范圍,滿足 LC 和 LC/MS 方法開發(fā)高效快速的需求。
系統(tǒng)配置
Agilent 1290 Infinity II 全能泵 (G7104A)
Agilent 1290 Infinity II 樣品瓶 進樣器 (G7129B)
Agilent InfinityLab 液相色譜系列 集成式柱溫箱 (G7130A)
Agilent Ultivo LC/TQ (G6465A)
Agilent 1290 Infinity II 二極管 陣列檢測器 (G7117B)
UHPLC方法參數(shù)
LC/TQ 采集方法參數(shù)
結果與討論
使用六種化合物標樣,比較了3 種分析條件下的性能。色譜圖顯示了使用簡單的甲酸流動相在 InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 色譜柱上獲得的 6 種堿性藥物化合物的分離情況。中間的色譜圖展示了使用相同流動相時傳統(tǒng) C18 色譜柱的性能。相比表面帶電荷的 C18,傳統(tǒng) C18 色譜柱上獲得的峰更寬。底部色譜圖顯示,使用三氟乙酸流動相可改善傳統(tǒng) C18 色譜柱的峰寬,如峰寬圖所示。由于三氟乙酸 pH 值極低,通常被認為是不理想的流動相。低 pH 值可能具有破壞性,且難以從色譜柱和 LC 系統(tǒng)中徹底清除。對于 LC/MS 用戶來說,由于三氟乙酸的離子 抑制作用,還會大幅降低信號強度。

堿性藥物化合物的色譜性能比較

清楚表明,表面帶電荷的 CS-C18 可使阿米替林始終保持較窄的峰形。即使在色譜 柱過載的情況下,其峰寬也始終比其他三 種傳統(tǒng) C18 色譜柱窄。

中等載樣量和高載樣量下 CS-C18 于傳統(tǒng) C18 之間的性能差異
InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 色譜柱更低的過載效應意味著其能在堿性化合物的雜質分析中表現(xiàn)得更出色。在雜質分析中,主要化合物的濃度通常較高,而其他目標分析物的濃度較低。對雜質含量為 0.25%(按重量計)的高濃度阿米替林樣品的雜質分析,隨載樣量增大,傳統(tǒng)的 C18 主峰大幅展寬,覆蓋了較早洗脫的雜質峰,并且明顯的峰拖尾現(xiàn)象影響了晚洗脫的雜質的峰形,而使用Poroshell 120 CS-C18 色譜柱時,主峰仍保持較窄的峰寬,足以與其前后的雜質峰分離。

在 CS-C18 和傳統(tǒng) C18上對阿米替林 +0.25% 雜質進行雜質分析
結論
在簡單的甲酸流動相條件下分析堿性分析物時,表面帶電荷 Agilent InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 色譜柱比傳統(tǒng) C18 鍵合相具有更出色的性能。獲得的峰形更高且更尖銳,提供了更高的分離度和靈敏度。CS-C18 還提高了載樣量,并能保持出色的堿性化合物峰形,實現(xiàn)更靈敏的雜質分析。
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