小鼠III型膠原蛋白（Collagen III）ELISA試劑盒

 （用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）

原理

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 Collagen III 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 Collagen III與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗小鼠Collagen III，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色，zui后加終止液，在450nm處測OD值，Collagen III濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中Collagen III濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準備試劑與收集血樣

1.          收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。

2.          標準品液配制：設標準管7管，每管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入100ng/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第六管中吸出300ul棄去。第七管為空白對照。加上原液管總共八管。

3.          10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4.         洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測程序

1.          加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。

2.          洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。

4.          洗板：同前。

5.          每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。

6.          洗板：同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。

結(jié)果計算與判斷

1.          所有OD值都應減除空白值后再行計算。

2.          以標準品100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0 ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應Collagen III含量。

試劑盒性能

             1.   靈敏度：zui小的Collagen III 檢測濃度小于1ng/ml。

2.        特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠Collagen III。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。

3.        重復性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10％。

注意事項

             1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。

 2.   洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。

             3.   板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

             4.   本試劑盒宜置4^oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！