關(guān)于是否應(yīng)對(duì)胎牛血清進(jìn)行熱滅活處理一直存在爭(zhēng)議。血清滅活起源于20世紀(jì)70年代之前，在過(guò)去并未有人質(zhì)疑滅活的必要性，滅活一直是默認(rèn)的常規(guī)操作。然而越來(lái)越多的證據(jù)表明，血清熱滅活對(duì)細(xì)胞并沒有顯著的正面作用。隨著研究者們對(duì)血清的理解加深以及胎牛血清生產(chǎn)工藝的不斷進(jìn)步，如今熱滅活不再是必選項(xiàng)。

什么是滅活

血清熱滅活是指將溶解狀態(tài)的血清置于56℃水浴加熱30min。滅活的主要目的是為了去除血清中的補(bǔ)體成分或者支原體等病原體。

什么是補(bǔ)體

補(bǔ)體是存在于動(dòng)物血液與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)，它們可輔助特異性抗體完成免疫溶菌和溶血作用，故稱為補(bǔ)體。激活的補(bǔ)體可介導(dǎo)細(xì)胞毒性作用，刺激平滑肌細(xì)胞收縮，刺激血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。

血清中的補(bǔ)體

胎牛的補(bǔ)體系統(tǒng)的發(fā)育不完整，因此胎牛血清中的補(bǔ)體含量非常低。Triglia和Linscott測(cè)定了牛血清中9種補(bǔ)體成分：胎牛血清中凝集素、C1和C6的含量約為成年牛的1-3%，除C3外其余成分的含量約為成年牛的5-50%，C3活性幾乎檢測(cè)不到。在補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，在未稀釋的血清中并未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。

熱滅活對(duì)細(xì)胞的影響

熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的狀態(tài)。加熱血清會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)因子、維生素、氨基酸等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被破壞，反而影響細(xì)胞的增殖速度和貼壁能力。有研究表明，熱滅活會(huì)損害血清中一些促進(jìn)細(xì)胞附著的成分。除此之外，熱滅活過(guò)程中還會(huì)產(chǎn)生大量的沉淀，這些沉淀物可能被誤認(rèn)為是微生物污染，從而給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)不必要的困擾。

支原體問(wèn)題

尚恩生物血清產(chǎn)品經(jīng)過(guò)萬(wàn)級(jí)GMP標(biāo)準(zhǔn)過(guò)濾灌裝線,連續(xù)3道0.1um濾膜過(guò)濾。通過(guò)細(xì)菌、真菌、支原體、噬菌體、病毒等多種病原體檢測(cè)，完quan不用擔(dān)心污染問(wèn)題，也不需要用熱滅活的方式進(jìn)行滅菌。

綜上，對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)效果而言，血清滅活可能弊大于利。因此大部分細(xì)胞培養(yǎng)沒有必要進(jìn)行血清滅活去除補(bǔ)體。不過(guò)在某些特殊情況下，如某些免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)或平滑肌細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)，可能需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。在實(shí)際應(yīng)用中，同學(xué)們還是要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求來(lái)決定是否滅活血清哦~

參考文獻(xiàn)

1. Triglia, R.P., Linscott,W.D. Titers of nine complement components, conglutinin and C3b-inactivator in adult and fetal bovine sera. Mol Immunol 17, 741-748 (1980).

2. Application-specific technical information – Application Notes: Heat inactivation – Are you wasting your time? Reprinted from Art To Science, 15, No. 1

3. Giard, D.J. Routine heat inactivation of serum reduces its capacity to promote cell attachment. In Vitro Cellular & Developmental Biology 23, 691-697 (1987).