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RNaseA和DNase I ,核酸提取好伴侶

來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年12月24日 09:19  

RNase A


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什么是RNaseA?
 

RNaseA,即核糖核酸酶A,是一種內(nèi)切核酸酶,能夠特異性地降解RNA分子。它能夠在嘧啶殘基的3’末端切割單鏈RNA,形成具有3’-末端嘧啶-3’-磷酸酯的寡核糖核苷酸。通過RNaseA的切割作用,相鄰的嘧啶核苷酸會被釋放,從而實(shí)現(xiàn)RNA分子的降解。

 

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RNaseA在核酸提取中的應(yīng)用
 

在DNA和質(zhì)粒提取過程中,RNAseA起到了至關(guān)重要的作用。由于一些實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用中需要獲得純凈的DNA樣本或質(zhì)粒樣本,而RNA的存在可能會干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,因此,在提取DNA時(shí),通常會添加RNaseA來降解樣品中的RNA分子。

 

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RNaseA的特異性及其優(yōu)勢
 

RNaseA對DNA分子并不具有降解作用。DNA分子具有穩(wěn)定的雙鏈結(jié)構(gòu),不容易被酶降解。因此,在使用RNaseA時(shí),可以確保DNA分子的完整性和濃度不受影響。這一特性使得RNaseA成為DNA提取過程中的工具。

 

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RNaseA使用的注意事項(xiàng)
 

在使用RNaseA時(shí),也需要注意酶的濃度和反應(yīng)時(shí)間。過高的酶濃度或過長的反應(yīng)時(shí)間可能會導(dǎo)致DNA分子也被部分降解,從而影響提取得到的DNA的完整性和濃度。因此,在使用RNaseA時(shí),需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠诽匦赃M(jìn)行優(yōu)化,以確保得到高質(zhì)量的純凈DNA樣本。

 

在使用RNaseA時(shí),需要注意對RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)的污染,做RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)時(shí),需要使用Surface RNase Remover (with Spray Bottle) 固相RNase清除劑(含噴霧瓶)(10609ES)清除RNase,從而創(chuàng)造潔凈的RNA工作環(huán)境。

 

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產(chǎn)品介紹
 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

產(chǎn)品特點(diǎn)

RNase A(10 mg/mL) 

10405ES

1mL

來源于牛胰,溶液形式提供,濃度為10 mg/mL,活性≥60 Kunitz U/mg

RNase A(100 mg/mL)

10406ES

1 mL

來源于牛胰,溶液形式提供,濃度為10 mg/mL,活性≥60 Kunitz U/mg

Ribonuclease A(RNase A),from bovine pancreas 

10407ES

100mg/1g

來源于牛胰,粉末形式提供,濃度為10 mg/mL,活性≥60 Kunitz U/mg

 

 

DNase I

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什么是DNase I?
 

DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名稱為脫氧核糖核酸酶I,是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶。DNase I水解單鏈或雙鏈DNA后的產(chǎn)物,5'端為磷酸基團(tuán),3'端為羥基。雖然DNase I裂解通常被認(rèn)為是非特異性裂解,但DNase I更有可能作用于某些序列片段,如小溝區(qū),并且更容易發(fā)生嘌呤-嘧啶序列的裂解。然而,當(dāng)DNase I作用于異質(zhì)dsDNA時(shí),所有四個(gè)堿基都將被切開,對特定堿基的影響不會超過其他堿基的3倍。

 

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DNase I的特性
 
  • 不含RNase:DNase I不含有RNase活性,因此可以用于各種RNA樣品的處理,而不會降解RNA。

  • 鈣離子依賴性:DNase I的活性依賴于鈣離子,同時(shí)它也能被鎂離子或二價(jià)錳離子激活。在不同的金屬離子存在下,DNase I的剪切特性也會有所不同。

  • 失活條件:DNase I可以通過加入EDTA至終濃度為2.5mM后,在65℃加熱10分鐘使其失活。此外,酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。

 

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DNase I在核酸提取及其他方面的應(yīng)用
 

1、核酸提取中制備不含DNA的RNA樣品:

在RNA提取過程中,DNase I可用于消化掉提取核酸中所殘留的DNA成分,從而得到高純度的RNA產(chǎn)物。這對于后續(xù)如mRNA表達(dá)量分析、轉(zhuǎn)錄組分析等實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。

 

2、RT-PCR反應(yīng)前去除DNA污染:

在進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)前,RNA樣品中可能存在的基因組DNA等DNA污染會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。DNase I可以有效地去除這些DNA污染,確保RT-PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性。

 

3、體外轉(zhuǎn)錄后去除DNA模板:

在體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)中,如使用T7、T3、SP6等RNA聚合酶進(jìn)行RNA合成時(shí),合成后的RNA可能會有DNA殘留。DNase I可用于去除這些模板DNA殘留,特別是在mRNA疫苗生產(chǎn)制作等需要高純度RNA的場合。

 

4、DNase I足跡實(shí)驗(yàn):

DNase I足跡實(shí)驗(yàn)(DNase I footprinting)是一種研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的方法。通過DNase I對DNA的切割作用,可以揭示出與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA區(qū)域,從而了解DNA與蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系。

 

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產(chǎn)品介紹
 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

產(chǎn)品特點(diǎn)

Deoxyribonuclease I(DNase I) from bovine pancreas

10607ES

15 KU/10×15KU

含氯化鈣的凍干粉形式,酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

Deoxyribonuclease I(DNase I) from bovine pancreas

10608ES

25 mg/100mg/1g

粉末形式,酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白



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