哪些應用方向可優(yōu)選Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase呢？

圖1.Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的應用方向

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以上這些應用展示了Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在分子生物學研究中的多功能性和高效性，使其成為實驗室中的工具之一。

多重PCR (Multiplex polymerase chain reaction，MPCR) 是指通過一次PCR反應同時對多個靶標進行擴增，結合一定的檢測手段對擴增產(chǎn)物進行檢測從而實現(xiàn)對多個靶標進行診斷的技術。MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。

多重PCR微生物多樣性檢測的應用非常廣泛，尤其是原核生物16S的多重PCR擴增測序。16S擴增子測序是指利用合適的通用引物擴增環(huán)境中微生物的16S rDNA/18S rDNA /ITS高變區(qū)或功能基因，通過高通量測序技術檢測PCR產(chǎn)物的序列變異和豐度信息，分析該環(huán)境下的微生物群落的多樣性和分布規(guī)律，以揭示環(huán)境樣品中微生物的種類、相對豐度、進化關系等。16S擴增子測序的技術路線如下：

圖2. 16S擴增子測序的技術路線

樣本：土壤DNA 10 ng

一輪PCR：25μL體系，擴增28個循環(huán)，MGI平臺16S引物（16S-V3-V4,16S-V4），擴增酶2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix（13283ES）

二輪PCR：25μL體系，第一輪產(chǎn)物投入量50 ng，擴增6個循環(huán)，擴增酶包含Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase及另外兩種高保真擴增酶，0.9x純化，50μL洗脫

• 引物16S-V3-V4擴增的文庫主峰在600bp左右，引物16S-V4擴增的文庫主峰在500bp左右，擴增條帶與理論文庫條帶吻合；

• 第二輪PCR擴增時，在兩種擴增引物體系下12928相對擴增酶A和擴增酶B的擴增能力強，文庫產(chǎn)量最高。