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精品推薦 | 這款酶在多重PCR擴增體系里表現(xiàn)佳!

來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年12月25日 08:47  

DNA聚合酶是PCR反應的核心組分,廣泛應用于生物及醫(yī)學研究等領域。對于普通PCR,常規(guī)熱穩(wěn)定DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)即可滿足需求。但對于高通量測序,擴增產(chǎn)物的準確性非常關鍵,優(yōu)選高保真酶進行擴增。常規(guī)的高保真擴增酶無法讀取和擴增含有尿嘧啶和次黃嘌呤的模板,翌圣生物通過定向改造,推出Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase,該聚合酶可兼容含U堿基模板和常規(guī)模板,擴增效率高保真性好,而且酶本身各項殘留均很低,滿足多種應用方向的擴增需求。

 

哪些應用方向可優(yōu)選Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase呢?

 

  • 重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化/酶法轉(zhuǎn)化的DNA擴增-甲基化研究;

  • 受損FFPE DNA樣本的擴增-腫瘤領域;

  • 防止擴增子的氣溶膠污染-病原領域;

  • 基于尿嘧啶切除的克隆-分子克隆。

 

 

圖1.Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的應用方向

<點擊查看大圖>

 

以上這些應用展示了Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在分子生物學研究中的多功能性和高效性,使其成為實驗室中的工具之一。

 

下面重點介紹Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在多重PCR擴增體系里的表現(xiàn):

多重PCR (Multiplex polymerase chain reaction,MPCR) 是指通過一次PCR反應同時對多個靶標進行擴增,結合一定的檢測手段對擴增產(chǎn)物進行檢測從而實現(xiàn)對多個靶標進行診斷的技術。MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。

 

多重PCR微生物多樣性檢測的應用非常廣泛,尤其是原核生物16S的多重PCR擴增測序。16S擴增子測序是指利用合適的通用引物擴增環(huán)境中微生物的16S rDNA/18S rDNA /ITS高變區(qū)或功能基因,通過高通量測序技術檢測PCR產(chǎn)物的序列變異和豐度信息,分析該環(huán)境下的微生物群落的多樣性和分布規(guī)律,以揭示環(huán)境樣品中微生物的種類、相對豐度、進化關系等。16S擴增子測序的技術路線如下:

 

圖2. 16S擴增子測序的技術路線

 

 
 

性能展示

 
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實驗條件

 

樣本:土壤DNA 10 ng

一輪PCR:25μL體系,擴增28個循環(huán),MGI平臺16S引物(16S-V3-V4,16S-V4),擴增酶2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix(13283ES)

二輪PCR:25μL體系,第一輪產(chǎn)物投入量50 ng,擴增6個循環(huán),擴增酶包含Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase及另外兩種高保真擴增酶,0.9x純化,50μL洗脫

 

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實驗結果

 

 

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實驗結論

 
  • 引物16S-V3-V4擴增的文庫主峰在600bp左右,引物16S-V4擴增的文庫主峰在500bp左右,擴增條帶與理論文庫條帶吻合;

  • 第二輪PCR擴增時,在兩種擴增引物體系下12928相對擴增酶A和擴增酶B的擴增能力強,文庫產(chǎn)量最高。

 

 

產(chǎn)品推薦

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)品應用

Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix Hieff Canace®耐U+高保真DNA聚合酶混合液

12928ES

耐U高保真擴增

熱敏UDG含甘油Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG),heat-labile,1 U/μL

10303ES

PCR防污染

Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL)

14537ES

基于尿嘧啶切除的克隆

2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

13283ES

多重PCR擴增


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