尿素檢測(cè)試劑盒內(nèi)包含了尿素檢測(cè)所需的所有試劑和相關(guān)組份。簡(jiǎn)單快捷的方案設(shè)計(jì)和優(yōu)化的試劑配比，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的尿素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)分析方案。

尿素檢測(cè)試劑盒：尿素測(cè)定試劑盒是一種定量比色法尿素測(cè)定方法。

艾美捷尿素檢測(cè)試劑盒：

貨號(hào)：KA1652

適用樣本類型：支氣管肺泡灌洗液（BAL）、細(xì)胞/組織培養(yǎng)液、牛奶、血漿、血清、尿液以及環(huán)境樣本（如廢水、土壤等）

樣本體積：

對(duì)于96孔板：5微升[血清和血漿樣本可以直接測(cè)定（n = 1）。尿液樣本應(yīng)在測(cè)定前用蒸餾水稀釋50倍（n = 50）。] 或50微升[對(duì)于低尿素樣本（< 5 mg/dL），例如組織/細(xì)胞提取物、BAL等，或者含有酚紅的培養(yǎng)基]

對(duì)于比色皿：20微升，或者對(duì)于低尿素樣本，使用200微升代替20微升。

檢測(cè)方法：比色法

測(cè)定類型：定量

校準(zhǔn)范圍：0.08至100 mg/dL（13微摩爾至17毫摩爾）

檢測(cè)下限：0.08 mg/dL（13微摩爾）

法規(guī)狀態(tài)：僅限研究使用（RUO）

質(zhì)量控制測(cè)試：標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說(shuō)明目的，不應(yīng)用于計(jì)算未知樣本。每次進(jìn)行測(cè)定都應(yīng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

儲(chǔ)存說(shuō)明：將試劑盒儲(chǔ)存在-20℃。為了獲得最佳結(jié)果，請(qǐng)按照協(xié)議中描述的方式儲(chǔ)存各組分。避免反復(fù)凍融。

測(cè)定程序：

將試劑平衡至室溫。在測(cè)定前短時(shí)間內(nèi)，將試劑A和試劑B等體積混合，制備足夠的工作試劑?；旌虾?span style="font-family: Calibri;">20分鐘內(nèi)使用工作試劑。

使用96孔板的程序：

血清和血漿樣本可以直接測(cè)定（n = 1）。尿液樣本應(yīng)在測(cè)定前用蒸餾水稀釋50倍（n = 50）。將5微升水（空白）、5微升標(biāo)準(zhǔn)品（50毫克/分升）和5微升樣本（雙份）轉(zhuǎn)移到透明底部96孔板的孔中。

對(duì)于低尿素樣本（< 5毫克/分升），例如組織/細(xì)胞提取物、支氣管肺泡灌洗液等，將50微升水（空白）、50微升5毫克尿素/分升（50毫克/分升標(biāo)準(zhǔn)品在水中稀釋10倍）和50微升樣本（雙份）分別轉(zhuǎn)移到不同的孔中。對(duì)于含有酚紅的培養(yǎng)基，將50微升培養(yǎng)基（空白）、50微升5毫克尿素/分升（50毫克/分升標(biāo)準(zhǔn)品在培養(yǎng)基中稀釋10倍）和50微升樣本（雙份）分別轉(zhuǎn)移到不同的孔中。

加入200微升工作試劑，并輕輕敲擊以混合。

在室溫下孵育20分鐘（低尿素樣本孵育50分鐘）。

在520納米處讀取光密度。對(duì)于低尿素樣本，在430納米處讀取光密度。

使用比色皿的程序：

按照96孔板測(cè)定的描述準(zhǔn)備樣本。將20微升水、標(biāo)準(zhǔn)品（50毫克/分升）和樣本轉(zhuǎn)移到適當(dāng)標(biāo)記的試管中。對(duì)于低尿素樣本，使用5毫克/分升的標(biāo)準(zhǔn)品和200微升代替20微升。加入1000微升工作試劑，并輕輕敲擊以混合。孵育20分鐘（低尿素樣本孵育50分鐘），并在520納米（或430納米）處讀取光密度。

結(jié)果計(jì)算：

樣本的尿素濃度（mg/dL）計(jì)算公式為：

尿素濃度=(ODsample?ODblank)/(ODstandard?ODblank)×n×[STD]其中，ODsample、ODblank和ODstandard分別是樣本、標(biāo)準(zhǔn)品和水的吸光度值。n是稀釋因子。[STD] = 50（對(duì)于低尿素樣本為5），尿素標(biāo)準(zhǔn)濃度（mg/dL）。換算：BUN（mg/dL）= [尿素] / 2.14。1 mg/dL尿素等于167 µM、0.001%或10 ppm。

使用96孔板協(xié)議對(duì)生物樣本進(jìn)行雙份測(cè)定。商業(yè)2%低脂牛奶（Kirkland）的尿素濃度為12.5 ± 0.9 mg/dL，Invitrogen胎牛血清為35.7 ± 0.1 mg/dL，人血清為22.1 ± 0.9 mg/dL，人血漿為22.3 ± 0.2 mg/dL，大鼠血清為31.8 ± 1.1 mg/dL，大鼠血漿為42.6 ± 0.1 mg/dL，新鮮人尿樣本為1501 ± 52 mg/dL，人BAL樣本為0.21 ± 0.03 mg/dL，細(xì)胞培養(yǎng)中為0.15至2.7 mg/dL。

96孔板測(cè)定中的標(biāo)準(zhǔn)曲線

尿素檢測(cè)試劑盒文獻(xiàn)參考：

Sahin E, Haubenwallner S, Kuttke M, Kollmann I, Halfmann A, Dohnal AB, Chen L, Cheng P, Hoesel B, Einwallner E, Brunner J, Kral JB, Schrottmaier WC, Thell K, Saferding V, Bluml S, Schabbauer GMacrophage PTEN Regulates Expression and Secretion of Arginase I Modulating Innate and Adaptive Immune Responses.J Immunol. 2014 Aug 15;193(4):1717-27. doi: 10.4049/jimmunol.1302167. Epub 2014 Jul 11.