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貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染優(yōu)選：ProteanFect轉(zhuǎn)染試劑盒 現(xiàn)貨代理
01. 貼壁VS懸浮轉(zhuǎn)染區(qū)別
貼壁轉(zhuǎn)染與懸浮轉(zhuǎn)染在操作流程、時(shí)間成本、轉(zhuǎn)染效率、操作難度、細(xì)胞用量、觀察難度和適用場(chǎng)景上有所區(qū)別。貼壁轉(zhuǎn)染通常需要較長(zhǎng)時(shí)間等待細(xì)胞貼壁，但操作簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)染效率高，適合常規(guī)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和需要高效率轉(zhuǎn)染的場(chǎng)景。懸浮轉(zhuǎn)染則時(shí)間成本較短，細(xì)胞用量更靈活，適合快速篩選實(shí)驗(yàn)和大規(guī)模轉(zhuǎn)染。
02. 細(xì)胞培養(yǎng)與準(zhǔn)備
以LX2細(xì)胞為例，這是一種人類肝星狀細(xì)胞的永生化細(xì)胞系，廣泛用于肝臟研究。LX2細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈上皮細(xì)胞樣。培養(yǎng)基成分為DMEM培養(yǎng)基，含10%胎牛血清和1%雙抗。轉(zhuǎn)染前，確保細(xì)胞處于良好生長(zhǎng)狀態(tài)，活率需超過90%。調(diào)整細(xì)胞轉(zhuǎn)染密度時(shí)，避免反復(fù)離心，以免影響細(xì)胞活力和轉(zhuǎn)染效率。
03. 轉(zhuǎn)染操作
3.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
- 提前一天種板，準(zhǔn)備貼壁細(xì)胞。
- 在96孔板中加入約2.5×10^4細(xì)胞，細(xì)胞過夜貼壁。
- 待細(xì)胞匯合度為70%-80%時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，用Opti-MEM輕柔清洗細(xì)胞兩次，并加入20 μL Opti-MEM備用。
3.2 配置ProteanFect轉(zhuǎn)染體系
- 在40 μL Reagent A中加入0.5 μg EGFP mRNA，充分混勻。
- 往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混勻。
3.3 轉(zhuǎn)染
- 將上述ProteanFect轉(zhuǎn)染液加入細(xì)胞。
- 37℃培養(yǎng)箱孵育60分鐘。
- 棄轉(zhuǎn)染液（為避免細(xì)胞損失，無需完·全棄盡）。
- 加入200 μL完·全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，24小時(shí)后檢測(cè)EGFP mRNA表達(dá)，48小時(shí)后檢測(cè)GFP pDNA表達(dá)。
04. 轉(zhuǎn)染檢測(cè)
使用ProteanFect試劑盒轉(zhuǎn)染LX2細(xì)胞后，可以通過熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá)，評(píng)估轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞活率可通過鏡下觀察、臺(tái)盼藍(lán)染色或流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測(cè)。
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