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貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染優(yōu)選:ProteanFect轉(zhuǎn)染試劑盒 現(xiàn)貨代理

來(lái)源:上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司   2025年01月15日 14:25  

01. 貼壁VS懸浮轉(zhuǎn)染區(qū)別

貼壁轉(zhuǎn)染與懸浮轉(zhuǎn)染在操作流程、時(shí)間成本、轉(zhuǎn)染效率、操作難度、細(xì)胞用量、觀察難度和適用場(chǎng)景上有所區(qū)別。貼壁轉(zhuǎn)染通常需要較長(zhǎng)時(shí)間等待細(xì)胞貼壁,但操作簡(jiǎn)單,轉(zhuǎn)染效率高,適合常規(guī)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和需要高效率轉(zhuǎn)染的場(chǎng)景。懸浮轉(zhuǎn)染則時(shí)間成本較短,細(xì)胞用量更靈活,適合快速篩選實(shí)驗(yàn)和大規(guī)模轉(zhuǎn)染。

02. 細(xì)胞培養(yǎng)與準(zhǔn)備

以LX2細(xì)胞為例,這是一種人類肝星狀細(xì)胞的永生化細(xì)胞系,廣泛用于肝臟研究。LX2細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),呈上皮細(xì)胞樣。培養(yǎng)基成分為DMEM培養(yǎng)基,含10%胎牛血清和1%雙抗。轉(zhuǎn)染前,確保細(xì)胞處于良好生長(zhǎng)狀態(tài),活率需超過90%。調(diào)整細(xì)胞轉(zhuǎn)染密度時(shí),避免反復(fù)離心,以免影響細(xì)胞活力和轉(zhuǎn)染效率。

03. 轉(zhuǎn)染操作

3.1 細(xì)胞準(zhǔn)備

  • 提前一天種板,準(zhǔn)備貼壁細(xì)胞。
  • 在96孔板中加入約2.5×10^4細(xì)胞,細(xì)胞過夜貼壁。
  • 待細(xì)胞匯合度為70%-80%時(shí),棄去培養(yǎng)基后,用Opti-MEM輕柔清洗細(xì)胞兩次,并加入20 μL Opti-MEM備用。

3.2 配置ProteanFect轉(zhuǎn)染體系

  • 在40 μL Reagent A中加入0.5 μg EGFP mRNA,充分混勻。
  • 往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混勻。

3.3 轉(zhuǎn)染

  • 將上述ProteanFect轉(zhuǎn)染液加入細(xì)胞。
  • 37℃培養(yǎng)箱孵育60分鐘。
  • 棄轉(zhuǎn)染液(為避免細(xì)胞損失,無(wú)需完·全棄盡)。
  • 加入200 μL完·全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),24小時(shí)后檢測(cè)EGFP mRNA表達(dá),48小時(shí)后檢測(cè)GFP pDNA表達(dá)。

04. 轉(zhuǎn)染檢測(cè)

使用ProteanFect試劑盒轉(zhuǎn)染LX2細(xì)胞后,可以通過熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá),評(píng)估轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞活率可通過鏡下觀察、臺(tái)盼藍(lán)染色或流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測(cè)。

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