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ProteanFect和Lipo系列轉(zhuǎn)染試劑的區(qū)別，怎么選擇？
ProteanFect和陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染（Lipo）是兩種常用的轉(zhuǎn)染技術(shù)，它們在實驗原理、操作步驟和適用范圍上存在一些區(qū)別。
實驗原理
Lipo轉(zhuǎn)染：
- 利用帶正電的陽離子脂質(zhì)體與帶負(fù)電的DNA通過靜電作用力結(jié)合形成DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。
- 復(fù)合物被細(xì)胞膜表面吸附后通過內(nèi)吞作用進入細(xì)胞，在內(nèi)涵體內(nèi)釋放，可能通過膜融合或內(nèi)吞體破裂等方式將DNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
- 最終DNA通過細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運到細(xì)胞核，實現(xiàn)外源基因的表達。
ProteanFect轉(zhuǎn)染：
- 核酸藥物與內(nèi)源蛋白自動組裝形成ProteanFect-核酸復(fù)合物。
- 細(xì)胞主動攝入ProteanFect-核酸復(fù)合物進入細(xì)胞，核酸分子釋放，內(nèi)源蛋白被內(nèi)在降解途徑降解。
- 外源基因表達。
操作步驟
Lipo轉(zhuǎn)染：
- 將核酸與Lipofection Reagent混合形成復(fù)合物。
- 將復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)體系中進行轉(zhuǎn)染。
- 經(jīng)過12-72小時后進行基因表達檢測。
ProteanFect轉(zhuǎn)染：
- 制備ProteanFect轉(zhuǎn)染體系。
- 將ProteanFect轉(zhuǎn)染體系加入待轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
- 根據(jù)細(xì)胞類型孵育15-120分鐘，最快可在結(jié)束反應(yīng)1小時后觀察到目的基因的表達。
適用范圍
Lipo轉(zhuǎn)染：
- 不適用于難轉(zhuǎn)細(xì)胞系和原代細(xì)胞，因為這些細(xì)胞可能對Lipo轉(zhuǎn)染產(chǎn)生較大毒性，轉(zhuǎn)染效率低，且對培養(yǎng)條件有特殊要求。
ProteanFect轉(zhuǎn)染：
- 適用于多種細(xì)胞系，包括難轉(zhuǎn)細(xì)胞系和原代細(xì)胞，因為ProteanFect具有高轉(zhuǎn)染效率和低細(xì)胞毒性，且操作簡便。
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