HIC-HPLC 檢測 DAR 值方法以新一代智能化1260 Infinity III Bio inert LC 或 1290 Infinity III Bio UHPLC 為平臺(tái)，對超高鹽流動(dòng)相有更好的耐受性。此方法由于使用不揮發(fā)高鹽流動(dòng)相，不能直接進(jìn)入質(zhì)譜表征，而安捷倫 2D LC MS 技術(shù)平臺(tái)可在不改變一維流動(dòng)相基礎(chǔ)上，二維實(shí)現(xiàn)在線除鹽后直接連接質(zhì)譜進(jìn)行表征，MS 定性后可直接計(jì)算 DAR 值。

RP-HPLC 方法是先將 ADC 進(jìn)行還原，反相色譜分離 ADC 不同亞基后，VWD 信號計(jì)算 DAR 值，此方法可連接 MSD XT 定性還原后的不同輕重鏈片段，因此也可以根據(jù) TIC 信號計(jì)算 ADC DAR 值。HPLC 方法平臺(tái)以 CDS2 軟件控制結(jié)合定制化 DAR 計(jì)算報(bào)告，自動(dòng)完成 DAR 值計(jì)算，保證計(jì)算準(zhǔn)確性的同時(shí)，提高數(shù)據(jù)處理效率，滿足研發(fā)和 QC 實(shí)驗(yàn)室合規(guī)性要求。

以 Native SEC Q TOF 和還原 RP Q TOF 方法檢測 ADC DAR 的方法中，DAR 計(jì)算由安捷倫 Bioconfirm DAR calculator 軟件自動(dòng)完成，軟件以解卷積后的質(zhì)譜數(shù)據(jù)自動(dòng)識別不同 DAR 值峰，將峰積分自動(dòng)加權(quán)計(jì)算，即可自動(dòng)完成 DAR 計(jì)算，這樣省卻了大量手動(dòng)計(jì)算工作同時(shí)減少了誤差（圖 3）。應(yīng)用安捷倫 LC Q TOF 平臺(tái)，RP Q TOF 可用于高通量 ADC DAR 值檢測，結(jié)果穩(wěn)定。

圖 3. Native SEC Q TOF 圖譜及（德曲妥珠單抗）ADC Dar 值計(jì)算（上）；RP Q TOF 圖譜及（德曲妥珠單抗）ADC Dar 值計(jì)算（下），紅線框?yàn)?BioConfirm 軟件 DAR calculator 自動(dòng)計(jì)算 DAR 值設(shè)置界面，軟件以解卷積后的質(zhì)譜數(shù)據(jù)自動(dòng)識別不同 DAR 值峰，將峰積分自動(dòng)加權(quán)計(jì)算，即可自動(dòng)完成 DAR 計(jì)算

安捷倫開發(fā)的基于 HPLC 和 LC QTOF平臺(tái)檢測 ADC DAR 的四個(gè)方法，可應(yīng)用于 ADC 藥物篩選、工藝開發(fā)、質(zhì)量研究和 QC 放行的整個(gè) ADC 藥物研發(fā)周期。

1. 生物制藥工作流程解決方案加速 ADC DAR 表征

2. 使用 UHPLC/Q-TOF 聯(lián)用系統(tǒng)測定抗體藥物 偶聯(lián)物 (ADC) 的藥物/抗體比率 (DAR)。

3. 分析抗體-藥物偶聯(lián)物的藥物結(jié)合位點(diǎn)利用自動(dòng)化樣品前處理與 LC/MS 分析

4. 利用正交分析方法提高抗體藥物偶聯(lián) 物的質(zhì)量

5. 測定血清純化所得的抗體藥物偶聯(lián)物的藥物/抗體比率