1. 實驗部分

Shimadzu LC-40B X3高效液相色譜儀；

色譜柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06）

純水機(jī)：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）

SHIMSEN Disc HPTFE針式過濾器（P/N：380-00341）；

低吸附PP樣品瓶SHIMSEN Vial（P/N：380-00509）；

Nichipet Air移液槍：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（P/N：00-NAR-100）；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）。

取牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品50 mg，用水溶解配置標(biāo)準(zhǔn)儲備液（5.0 mg/mL）。取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL，用磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至10 mL，制成標(biāo)準(zhǔn)中間液體（0.5 mg/mL），臨用現(xiàn)配。

準(zhǔn)確移取上述牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用磷酸鹽緩沖液Ⅰ稀釋定容，配制成濃度分別為1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL 和200.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用現(xiàn)配。

注：乳鐵蛋白易被玻璃樣品瓶吸附，建議使用低吸附PP樣品瓶；低濃度點(diǎn)（1.0 μg/mL、5.0 μg/mL）需現(xiàn)配現(xiàn)進(jìn)樣。

微孔濾膜可能會導(dǎo)致目標(biāo)化合物吸附，樣品不建議過膜。

色譜柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06）

流 速：1.0 mL/min

進(jìn)樣量：50 μL

柱 溫：30 ℃

檢測器：280 nm

流動相：A：0.1%三氟乙酸溶液

B：乙腈

梯度程序如下：

2. 實驗結(jié)果

按照上述色譜條件（1.3）進(jìn)行采集，色譜圖如下：

注：首次使用Shim-pack Scepter C4-300 色譜柱時，可能出現(xiàn)響應(yīng)低（低濃度點(diǎn)甚至不出峰）、峰形不對稱的情況，需對色譜柱進(jìn)行鈍化處理（即使用0.5 mg/mL 的標(biāo)品進(jìn)樣100 μL），鈍化后連續(xù)進(jìn)空白溶劑直至無乳鐵蛋白目標(biāo)峰后，再進(jìn)行分析。

3. 結(jié)論

本文建立了食品中乳鐵蛋白的HPLC 測定方法。參考GB 5009.299-2024 中的色譜條件，采用色譜柱Shim-pack Scepter C4-300 分析乳鐵蛋白，結(jié)果顯示，乳鐵蛋白峰型對稱，重現(xiàn)性良好，滿足檢測要求。此方法可為食品中乳鐵蛋白的測定提供參考。