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一、 儀器介紹

實驗目的：

確定重復接觸受試物對哺乳動物是否可引起皮膚反應及其程度

試驗概述：  

局部封閉涂皮試驗（Buehler test，BT）和豚鼠最大值試驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗動物通過多次皮膚涂抹（誘導接觸）或皮內(nèi)注射受試物10d~14d（誘導階段）后,給予激發(fā)劑量的受試物,觀察實驗動物,并與對照動物比較對激發(fā)接觸受試物的皮膚反應強度。

小鼠局部淋巴結(jié)分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部給予實驗動物受試物,引起淋巴結(jié)的淋巴細胞增生,淋巴細胞增生與受試物劑量（過敏程度）成比例。利用放射性標記方法,測定試驗組與對照組淋巴細胞的標記率,并進行對比,獲得刺激指數(shù),評價致敏強度。

應用范圍：

應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第9部分皮膚反應（致敏）試驗》

二、試驗步驟:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠

操作步驟:

誘導階段:通過封閉式皮膚涂抹受試物，持續(xù)10-14天。激發(fā)階段:間隔后再次涂抹受試物，觀察皮膚反應。

觀察指標:紅斑、水腫等皮膚炎癥反應的強度(主觀評分)

優(yōu)點:

模擬人類皮膚接觸途徑，適用于局部制劑(如化妝品、外用藥物)

無需注射，操作相對溫和。0

缺點:

敏感性較低，可能漏檢弱致敏物，。依賴主觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳統(tǒng)化妝品、外用藥品的安全性評估。

2.豚鼠最大值試驗（GPMT）

動物模型:豚鼠

操作步驟:

誘導階段:皮內(nèi)注射受試物（常聯(lián)合弗氏佐劑）結(jié)合皮膚涂抹，持續(xù)10-14天。

激發(fā)階段:再次涂抹受試物，評估皮膚反應。

觀察指標:與BT類似，但反應更強烈(紅斑、水腫、硬結(jié))

優(yōu)點:

敏感性高，可檢測強致敏物和弱致敏物;

“金標準”，尤其適用于化學品和工業(yè)原料。

缺點:

使用佐劑可能引發(fā)過度免疫反應，導致假陽性;

動物痛苦程度較高，倫理爭議較大。

應用場景:工業(yè)化學品、強致敏性物質(zhì)(如染發(fā)劑、橡膠添加劑)的嚴格檢測。

3.小鼠局部淋巴結(jié)試驗（LLNA）

動物模型:小鼠.

操作步驟:

誘導階段:連續(xù)3天耳部涂抹受試物。

檢測指標:通過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺激指數(shù)（SI）觀察指標:淋巴結(jié)淋巴細胞增殖程度（SI>3判為陽性）

優(yōu)點:

客觀定量:減少主觀評分誤差；

符合3R原則:動物用量少，無需激發(fā)階段，痛苦小;

高效快速:試驗周期短(約1周)。

缺點:

對某些物質(zhì)(如金屬鹽)敏感性不足，需使用放射性物質(zhì)或特殊設(shè)備，成本較高。

應用場景:歐盟等法規(guī)優(yōu)先推薦的替代方法，廣泛用于藥品、化妝品及化工產(chǎn)品的初篩。