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UFC5010BK Merck Millipore 超濾管 0.5ml 10KD 用戶指南

來(lái)源:上海易匯生物科技有限公司   2025年04月28日 09:11  

UFC5010BK Merck Millipore 超濾管 0.5ml 10KD 用戶指南

——高效生物分子濃縮與純化的實(shí)驗(yàn)室利器

一、產(chǎn)品概述

UFC5010BK 是默克密理博(Merck Millipore)旗下 Amicon® Ultra 系列超濾離心管,專為生物分子(如蛋白質(zhì)、核酸、抗體等)的濃縮、脫鹽及緩沖液置換設(shè)計(jì)。該產(chǎn)品采用 10,000 Dalton 分子量截留(MWCO) 的再生纖維素膜(Ultracel®-10),結(jié)合垂直濾膜與反向旋轉(zhuǎn)回收技術(shù),可實(shí)現(xiàn) 90%以上樣品回收率25–30倍濃縮系數(shù),適用于 HPLC 前處理、蛋白純化及臨床樣本分析等場(chǎng)景。

二、技術(shù)規(guī)格

  • 膜材質(zhì):Ultracel®再生纖維素

  • 截留分子量(MWCO):10,000 Dalton

  • 樣品容量:0.5 mL(最大起始體積)

  • 濃縮后體積:15–20 μL(典型值)

  • 離心條件

    • 濃縮:14,000 × g(最大),推薦 7,500–10,000 × g

    • 回收:1,000 × g(反向旋轉(zhuǎn))

  • 化學(xué)兼容性:pH 1–9,兼容 SDS、Tris-HCl、尿素等緩沖體系

  • 無(wú)菌性:非無(wú)菌,一次性使用

  • 存儲(chǔ)條件:15–30°C,保質(zhì)期 3 年

三、核心優(yōu)勢(shì)

  1. 高效濃縮

    • 垂直濾膜設(shè)計(jì)減少濃差極化,避免濾膜堵塞,處理時(shí)間僅需 10–30分鐘。

    • 示例:0.25 mg/mL 細(xì)胞色素 c(12.4 kDa)濃縮后回收率 >95%。

  2. 高回收率

    • 低吸附濾膜與聚丙烯外殼結(jié)合,實(shí)現(xiàn) >90% 樣品回收率(稀釋起始溶液)。

    • 反向旋轉(zhuǎn)功能確保濃縮物回收,避免吸量誤差。

  3. 靈活應(yīng)用

    • 支持蛋白、核酸、抗體等生物分子的濃縮與純化。

    • 可用于去除引物、連接子或標(biāo)記反應(yīng)中的高分子雜質(zhì)。

四、操作流程

(一)預(yù)處理
  1. 潤(rùn)洗

    • 新管使用前,加入超純水至膜上方,冰浴或 4°C 預(yù)冷 5 分鐘,倒出液體。

    • 重復(fù) 1 次,確保膜潤(rùn)濕。

  2. 平衡

    • 將超濾管插入 1.5 mL 離心管中,使用相同型號(hào)空管進(jìn)行離心平衡。

(二)加樣
  1. 樣品量

    • 加入體積不超過(guò)管頂白線(通常 ≤500 μL)。

    • 示例:0.5 mL 1 mg/mL BSA 溶液。

  2. 離心

    • 4°C 預(yù)冷離心機(jī),設(shè)置轉(zhuǎn)速 ≤10,000 × g,離心 15–30 分鐘。

    • 示例參數(shù):7,500 × g、25 分鐘(10,000 MWCO 膜濃縮 0.25 mg/mL 細(xì)胞色素 c)。

(三)濃縮與回收
  1. 濃縮判斷

    • 當(dāng)濾液體積接近 1 mL 時(shí),取 50 μL 緩沖液 +10 μL 濾液,通過(guò) Bradford 法或電泳檢測(cè)蛋白泄漏。

  2. 緩沖液置換

    • 濃縮至 1 mL 后,加入等體積新緩沖液(經(jīng) 0.22 μm 過(guò)濾),重復(fù)離心 3 次。

  3. 終體積調(diào)整

    • 根據(jù)需求,將樣品濃縮至 ≤50 μL(如需更高濃度,可降低轉(zhuǎn)速至說(shuō)明書推薦值以下)。

  4. 反向旋轉(zhuǎn)回收

    • 離心結(jié)束后,將超濾管倒置,1,000 × g 離心 1–2 分鐘,回收濃縮液。

(四)清洗與保存
  1. 清洗

    • 使用后,用超純水沖洗 3 次,再用 75% 乙醇沖洗 1 次。

    • 殘留水可通過(guò) 1,000 × g 離心 1 分鐘去除。

  2. 保存

    • 干燥后置于 4°C 或 -20°C 保存,避免膜干燥開(kāi)裂。

五、應(yīng)用案例

  1. 蛋白質(zhì)濃縮

    • 使用 UFC5010BK 將 1 mL 0.5 mg/mL BSA 濃縮至 100 μL,回收率 92%(7,500 × g、10 分鐘)。

  2. 核酸脫鹽

    • 0.5 mL 50 ng/μL DNA 溶液經(jīng) 3 次緩沖液置換,鹽濃度從 150 mM 降至 10 mM 以下。

  3. 抗體純化

    • 從組織培養(yǎng)基中濃縮抗體,結(jié)合 UFC5010BK 與蛋白 A 親和柱,實(shí)現(xiàn)抗體純化與脫鹽同步進(jìn)行。

六、質(zhì)量控制與驗(yàn)證

  1. 批次一致性

    • MWCO 驗(yàn)證(電泳法)

    • 回收率測(cè)試(BSA/DNA 標(biāo)準(zhǔn)品)

    • 膜完整性檢測(cè)(氣泡壓力法)

    • 每批次提供 CoA(Certificate of Analysis),包含:

  2. 性能驗(yàn)證

    • 重復(fù)性測(cè)試(n=10):BSA 回收率 CV ≤3%,DNA 濃縮時(shí)間 CV ≤5%。

七、注意事項(xiàng)

  1. 操作安全

    • 避免膜干燥,潤(rùn)濕后保持濕潤(rùn)狀態(tài)直至使用結(jié)束。

    • 離心時(shí)確保轉(zhuǎn)子平衡,防止離心機(jī)損壞。

  2. 樣品兼容性

    • 高粘度樣品(如甘油)需稀釋后使用。

    • 強(qiáng)酸/強(qiáng)堿溶液可能腐蝕再生纖維素膜,需預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

  3. 離心條件

    • 離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致蛋白沉淀,建議分步離心并監(jiān)測(cè)濾液狀態(tài)。



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