在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，RPMI-1640 培養(yǎng)基以其性能和廣泛的適用性脫穎而出。本文將深入探討 RPMI-1640 培養(yǎng)基的配方、應(yīng)用以及操作使用要點(diǎn)。

一、RPMI-1640 培養(yǎng)基的配方與特點(diǎn)

RPMI-1640 是由 Moore 等人于 1967 年在 Roswell Park Memorial Institute 開發(fā)的細(xì)胞培養(yǎng)基，是改進(jìn)型的 McCoy's 5A 培養(yǎng)基，使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)。RPMI-1640 培養(yǎng)基在基礎(chǔ)成分上添加了 10% 胎牛血清和 1% 雙抗（青霉素 - 鏈霉素溶液）。這種配方為細(xì)胞提供了全面的營養(yǎng)支持和保護(hù)。

即用型配方

RPMI-1640 培養(yǎng)基（含 10% 血清，1% 雙抗）經(jīng)過精心配制，無需額外添加成分，開瓶即可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。這種即用型設(shè)計(jì)大大簡化了實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作，減少了因配制培養(yǎng)基帶來的誤差和污染風(fēng)險(xiǎn)。特別適合那些對時(shí)間敏感的實(shí)驗(yàn)和需要快速啟動(dòng)培養(yǎng)的場景。

營養(yǎng)全面

RPMI-1640 培養(yǎng)基本身含有豐富的營養(yǎng)成分，包括各種氨基酸、維生素、礦物質(zhì)和葡萄糖。10% 胎牛血清的添加進(jìn)一步豐富了培養(yǎng)基中的生長因子和細(xì)胞黏附因子，支持細(xì)胞的快速增殖和健康生長。1% 雙抗成分則有效抑制細(xì)菌和真菌的生長，降低培養(yǎng)過程中的污染風(fēng)險(xiǎn)。

二、RPMI-1640 培養(yǎng)基的應(yīng)用范圍

廣泛適用于多種細(xì)胞類型

RPMI-1640 培養(yǎng)基適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，包括 Jurkat、MCF-7、PC-12、PBMC、星型膠質(zhì)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等。它尤其適用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，為這些細(xì)胞提供了理想的生長環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞的旺盛生長和穩(wěn)定傳代。

滿足多種研究和生產(chǎn)需求

在生物醫(yī)學(xué)研究中，RPMI-1640 培養(yǎng)基被廣泛用于細(xì)胞的長期培養(yǎng)、基因轉(zhuǎn)染、藥物篩選等實(shí)驗(yàn)。在生物制藥領(lǐng)域，它為重組蛋白表達(dá)和疫苗生產(chǎn)提供了穩(wěn)定的培養(yǎng)平臺。

三、RPMI-1640 培養(yǎng)基的操作使用方法

儲存與準(zhǔn)備

RPMI-1640 培養(yǎng)基應(yīng)保存在 4℃左右的低溫環(huán)境中，避免光照直射和溫度波動(dòng)過大。在使用前，將培養(yǎng)基從冰箱中取出，使其恢復(fù)至室溫，以確保細(xì)胞在接種時(shí)不會因溫度驟變而受到應(yīng)激。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1. 細(xì)胞接種：根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求，將細(xì)胞以適當(dāng)?shù)拿芏冉臃N到培養(yǎng)容器中。對于貼壁細(xì)胞，可以使用培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板；對于懸浮細(xì)胞，通常使用搖瓶或懸浮培養(yǎng)袋。

2. 培養(yǎng)條件：將接種后的細(xì)胞放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，設(shè)置溫度為 37℃，濕度保持在 95% 以上，二氧化碳濃度為 5% 左右。這些條件有助于維持培養(yǎng)基的 pH 值穩(wěn)定，為細(xì)胞提供一個(gè)適宜的生長環(huán)境。

3. 定期換液：根據(jù)細(xì)胞的生長速度和代謝需求，定期更換培養(yǎng)基，一般每 2 - 3 天更換一次。換液時(shí)，吸出舊的培養(yǎng)基，用適量的 PBS 或無菌生理鹽水輕輕沖洗細(xì)胞，再加入新鮮的 RPMI-1640 培養(yǎng)基。

4. 觀察與記錄：在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，定期使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞的生長曲線和分裂情況。注意觀察細(xì)胞的貼壁情況、細(xì)胞密度和細(xì)胞形態(tài)是否正常。

凍存與復(fù)蘇

當(dāng)細(xì)胞生長達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的密度或狀態(tài)時(shí)，可以進(jìn)行凍存。凍存時(shí)，使用含 10% DMSO 的凍存培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸浮液分裝到凍存管中，放入程序降溫盒中逐步降溫，最終保存于液氮罐中。復(fù)蘇時(shí)，將凍存管從液氮中取出，迅速放入 37℃水浴中快速解凍，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器中，加入新鮮的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

傳代操作

對于貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長達(dá)到 80% - 90% 匯合度時(shí)，可以使用胰蛋白酶進(jìn)行消化，按照適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行傳代。對于懸浮細(xì)胞，直接稀釋細(xì)胞懸液進(jìn)行傳代。傳代比例根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求確定，一般為 1:2 - 1:10。

四、RPMI-1640 培養(yǎng)基的優(yōu)勢與注意事項(xiàng)

優(yōu)勢

• 廣泛適用性：適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，特別是懸浮細(xì)胞。

• 營養(yǎng)全面：含有豐富的營養(yǎng)成分和生長因子，支持細(xì)胞的快速增殖和健康生長。

• 即用型配方：無需額外添加成分，開瓶即用，節(jié)省時(shí)間，減少污染風(fēng)險(xiǎn)。

• 成本效益：提供多種成分組合的細(xì)胞培養(yǎng)基，滿足各類需求。

注意事項(xiàng)

• 儲存條件：嚴(yán)格控制儲存溫度和環(huán)境，避免反復(fù)凍融。

• 血清選擇：選擇高質(zhì)量的胎牛血清，以確保細(xì)胞生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

• 定期評估：定期評估培養(yǎng)基的性能和細(xì)胞的生長狀態(tài)，必要時(shí)更換培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)條件。