B細(xì)胞（也稱B淋巴細(xì)胞，骨髓依賴性淋巴細(xì)胞），由骨髓中的造血干細(xì)胞分化發(fā)育而來，在人體內(nèi)合適環(huán)境刺激下增殖分化為漿母細(xì)胞及漿細(xì)胞，而漿細(xì)胞合成和分泌免疫球蛋白，在體液免疫反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。B細(xì)胞可生成高親和力抗體、免疫記憶、充當(dāng)抗原呈遞細(xì)胞，并分泌細(xì)胞因子（包括CCL22、CCL17、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、IL-10、TGF-β1、IL-35）。記憶B細(xì)胞和漿B細(xì)胞可生成諸如免疫球蛋白（Ig）IgM、IgG和IgE等抗體。

• 特征：未接觸過抗原的成熟B細(xì)胞；

• 表面標(biāo)志：CD19+、CD20+、IgM+、IgD+、CD27-；

• 功能：在外周免疫器官中等待抗原刺激。

• 特征：終末分化的B細(xì)胞，專門分泌抗體；

• 表面標(biāo)志：CD19low、CD20-、CD38+、CD138+；

• 功能：大量產(chǎn)生和分泌特異性抗體。

B細(xì)胞的發(fā)育和成熟主要發(fā)生在骨髓。

起始階段，來自造血干細(xì)胞。開始重鏈（IgH）基因重排。

成功完成重鏈基因重排并表達μ重鏈。開始輕鏈（IgL）基因重排。

表面表達完整的IgM型B細(xì)胞受體（BCR）。通過中央耐受機制（如克隆清除）排除對自身抗原反應(yīng)的B細(xì)胞。

表面同時表達IgM和IgD型BCR，具備全功能。離開骨髓，遷移到外周淋巴器官（如淋巴結(jié)、脾臟）。

圖1. B細(xì)胞的發(fā)育過程[1]

漿細(xì)胞分泌抗體，用于中和病原體、激活補體系統(tǒng)或通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）機制清除病原體。

B細(xì)胞通過MHC-II分子向T細(xì)胞呈遞抗原，促進T細(xì)胞的活化。

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）分泌抑制性細(xì)胞因子（如IL-10、TGF-β），抑制過度的免疫反應(yīng)，維持免疫穩(wěn)態(tài)。

記憶B細(xì)胞在二次免疫中快速應(yīng)答，提高免疫效率。

圖2.B細(xì)胞功能[2]

在沒有刺激的情況下，B細(xì)胞一般不會增殖。在培養(yǎng)條件下并給予外源信號，B細(xì)胞能夠活化并且增殖。B細(xì)胞被激活的方式有兩種，分別是T細(xì)胞依賴型和非T細(xì)胞依賴型。

這種類型的活化可生成記憶和血漿B細(xì)胞。Naive B細(xì)胞與可溶性或膜結(jié)合型抗原結(jié)合，并使抗原內(nèi)化。B細(xì)胞在向MHCII上呈遞這種抗原，并被輔助性T細(xì)胞（Th）識別。CD40受體與配體結(jié)合需要第二種信號。另外Th細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，其可促進B細(xì)胞分化為能夠生成IgG、 IgA、或 IgE的成熟B細(xì)胞。

這種類型的活化可生成漿細(xì)胞和IgM。B細(xì)胞被細(xì)菌或病毒表面的保守重復(fù)表位活化，包括脂多糖（LPS）或DNA片段。BCR識別T細(xì)胞非依賴性抗原聚集并交聯(lián)。Toll樣受體（TLR）提供第二信號?；罨腂細(xì)胞會產(chǎn)生較強的抗體反應(yīng)，但不會生成記憶B細(xì)胞。

圖3. T細(xì)胞依賴性和非依賴性 B細(xì)胞激活途徑示意圖[3]

DC，樹突狀細(xì)胞；pMHC II，肽-MHC II 復(fù)合物；TCR，T細(xì)胞受體；BCR，B細(xì)胞受體

人B細(xì)胞：外周血單個核細(xì)胞（PBMCs，經(jīng)Ficoll分離）或純化的CD19?B細(xì)胞。純度＞95％。

B細(xì)胞需特異性信號刺激才能增殖和分化。

將純化的Ｂ細(xì)胞以1.5×103個/Ｌ濃度置于24孔板的RPMI1640培養(yǎng)液，10% FBS， 以 0.002L/孔培養(yǎng)細(xì)胞。 加入以下表1中的細(xì)胞因子組合，培養(yǎng)4d。

漿母細(xì)胞分化，在培養(yǎng)第4天，收集細(xì)胞并用培養(yǎng)液清洗，去除CD40L，CpG，加入以下表2中細(xì)胞因子組合，促進漿細(xì)胞分化3d。