小鼠GRO/KCELISA檢測試劑盒
日本IBL進口原裝   貨號:27137 規(guī)格：96T
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前言簡介
小鼠趨化因子GRO/KC是一種強效的嗜中性趨化因子,與人GRO為同源物,為單核細胞和中性粒細胞的化學(xué)誘導(dǎo)物. 據(jù)報道它是由激活的單核細胞和纖維原細胞產(chǎn)生的
原理
此試劑盒運用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠GRO/KC的量成正比.
 
檢測范圍
23.44 ~ 1,500 pg/mL
 
預(yù)期用途
 
■此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中GRO/KC的定量檢測
 
■重組和天然的小鼠GRO/KC都可以檢測
 
試劑盒成分
1  預(yù)包被板:        抗小鼠GRO/KC兔子IgG,親合純化               96T
2  酶標記抗體:
   （30倍濃縮）HRP標記抗小鼠GRO/KC兔子IgG,親合純化         0.4mL x 1
3  標準品:           重組小鼠GRO/KC                       0.5mL x 2     
4  EIA緩沖液:         含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS                       30mL x 1
5  標記抗體稀釋液:       含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS                  12mL x 1
6  顯色劑:                                 TMB底物液                                                15mL x 1
7  終止液:                                     1N硫酸                                                   12mL x 1
8  濃縮洗滌液:
 （40倍濃縮） 含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS                      50mL x 1
 
 
操作說明
1實驗所需器材（但試劑盒沒有提供）
  酶標儀（450nm）           微移液管及其槍頭
  量筒及燒杯             蒸餾水
  冰箱（4°C）               坐標紙（log/log）
  吸水紙                 試管（用于標準品稀釋）
  溫育箱（37°C ± 1°C）
  洗瓶（用于洗板）
  一次性試劑管（用于濃縮酶標記抗體和顯色劑）
2準備
 

1. 洗滌液的準備

試劑盒的洗滌液是一種40倍濃縮液,用1950 mL蒸餾水稀釋50 mL的濃縮洗滌液,制成2000mL即用稀釋洗滌液. 置于冰箱內(nèi)可保存2周.
 

1. 酶標記抗體的準備

試劑盒中的標記抗體是一種30倍濃縮物,根據(jù)所需量, 用標記抗體稀釋液稀釋30倍.
示例:
如果你用一條板（8孔）,就需800  μL.的標記抗體.就用870  μL的標記抗體稀釋液稀釋30  μL抗體濃縮液,充分混勻.并每孔各加100 μL
濃縮酶標記抗體需稀釋后才能用于實驗
剩余的稀釋標記抗體液需密封瓶裝,存于4°C
 

1. 標準品的準備

加0.5 mL的蒸餾水到瓶裝標準品,制成濃度為3,000 pg/mL小鼠GRO/KC標準品液
 

1. 標準品的稀釋

準備8支試管,并每支各加230 μL  EIA緩沖液.稀釋成如下濃度,步驟如下圖所示:
試管1                            1,500 pg/mL
試管2                            750 pg/mL
試管3                                              375 pg/ mL
試管4                                             187.5 pg/mL
試管5                                             93.75 pg/mL
試管6                                             46.88 pg/mL
試管7                                             23.44 pg/mL
試管8                                   0 pg/mL（樣品空白對照）
吸取230ul的標準品液于1號管混勻，然后從1號管吸取230ul加入2號管混勻，如下圖所示,按此規(guī)律稀釋，標準品濃度范圍為23.44-1500 pg/mL,第8號管為0 pg/mL作為樣品空白對照


 

1. 樣品稀釋

 樣品如需稀釋時,必須用EIA緩沖液進行稀釋
 如果樣品中小鼠的GRO/KC的濃度范圍一無所知的話,預(yù)先準備幾個不同稀釋梯度的樣品液來確定*的檢測濃度.
3實驗步驟
使用前，將所有試劑應(yīng)平衡至室溫，大約30min，充分混勻，確保試劑質(zhì)量無改變，標準曲線和樣品檢測必須同時進行.

1）設(shè)試劑空白對照，并于相應(yīng)的微孔中加入100ul EIA緩沖液
2）  確定好樣品空白對照孔，檢測樣品孔和標準品孔，分別將100ul樣品對照品（8號管）、檢測樣品和稀釋好的標準品（1-7號管）加入到相應(yīng)的微孔中。
3）蓋板，37°C下溫育1小時
4）用洗滌瓶劇烈洗板,再加入稀釋洗滌液,靜置15-30秒,再*倒去孔內(nèi)反應(yīng)液
重復(fù)洗板7次.
zui后在吸水紙上拍干,去除殘留液滴
如用自動洗板機洗板,先自動洗4次,再按上述用洗瓶手工洗3次
5）除試劑空白對照孔外,其余每孔各加100ul酶標抗體
6）蓋板，37°C下溫育30min
7）按照上述步驟4）洗板9次
8）  用一次性試管取所需量的顯色劑，各加100ul顯色劑于微孔中.為了避免污染，勿將剩余試劑在倒回試劑瓶中
9）室溫避光溫育30min，加入顯色劑后溶液顏色會變成藍色
10）每孔各加100ul終止液，溶液顏色會變成黃色
11）擦去微孔板底部的污跡或水滴，確保微孔內(nèi)溶液無氣泡產(chǎn)生.加入終止液后30min內(nèi)于酶標儀450nm處讀取結(jié)果

 
特別注意
 

1. 收集樣品后應(yīng)盡快檢測. 如需保存, 凍存樣品,但要避免反復(fù)凍融.檢測前,將樣品解凍至室溫.
2. 如樣品需稀釋,用EIA緩沖液稀釋
3. 建議樣品和標準品做雙份檢測
4. 保持樣品處于中性PH范圍.有機溶劑的污染會影響實驗結(jié)果
5. 只能用本試劑盒提供的洗滌液洗板.不充足的洗板會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果
6. 在吸水紙上拍干去除殘留液滴時,切勿用吸水紙刮擦孔內(nèi)壁
7. 顯示劑應(yīng)避光保存并避免與金屬物質(zhì)接觸
8. 加終止液后,30 min內(nèi)就應(yīng)讀取實驗結(jié)果

 
結(jié)果計算
所有實驗數(shù)據(jù)（包括標準品,檢測樣品的OD值）,都應(yīng)減去樣品空白對照的OD值.
在log-log坐標紙用,以較正的OD值為縱坐標,相對應(yīng)的濃度為橫坐標,建立標準曲線. 樣品直接在標準曲線上獲取濃度值.
標準曲線示范

 
上圖所示典型標準曲線僅用于演示示范,不能用于試驗數(shù)據(jù)的獲取.每次實驗都應(yīng)建立其標準曲線.
 
使用及處理常規(guī)注意事項
1所有試劑置于2 - 8°C保存.實驗前將試劑平衡至室溫（約30分鐘）
2瓶裝標準品是凍干品,故小心打開瓶蓋
3終止液是強酸物質(zhì).使用時,避免其接觸皮膚和衣膚.
4棄置用過的物質(zhì)前,用水沖洗
5 濃縮酶標抗體,EIA緩沖液和濃縮洗滌液可能會出現(xiàn)沉淀,但這并不會影響實驗
6使用試劑后應(yīng)洗手
7切勿混用不同批號的試劑
8別使用過期的試劑
9試劑盒僅供研究用,不能用于臨床診斷.
 
 
存儲與有效期
存儲條件:2 - 8°C
有效期見試劑盒外包裝
 
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。
 
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