生化鑒定條作為成套生化管的升級產(chǎn)品，以其快速、簡單、操作方便的優(yōu)勢，受到廣大用戶的好評。我公司目前有各種生化鑒定條出售，滿足不同客戶的需求（產(chǎn)品目錄和信息參考：HBI微生物生化鑒定條 ）。但在實(shí)際使用過程中，經(jīng)常會碰到一些疑問或問題，本文將對有關(guān)問題進(jìn)行解釋和討論。

1、做生化鑒定前一定要進(jìn)行純化嗎？

  對單一菌種進(jìn)行鑒定，不需要進(jìn)行純化操作，只需要保證菌體新鮮就行。但對于在選擇性培養(yǎng)基上分離出的菌，最好進(jìn)行純化后在進(jìn)行鑒定。原因如下：

  （1）選擇性培養(yǎng)基上初步分離的菌落，不一定是單一菌種形成的，若有其它菌種，會干擾試驗(yàn)結(jié)果，造成誤判；

  （2）選擇性培養(yǎng)基成分復(fù)雜，挑菌時若沾取了少量培養(yǎng)基，有可能會對鑒定結(jié)果造成干擾；

  （3）選擇性培養(yǎng)基中通常含有一些抑制成分，平板上長出的菌落會受到不同程度的抑制或損傷，活力不好，不利于生化結(jié)果的觀察和判定；

  （4）選擇些平板上長出的菌落通常較小，若需要做很多生化試驗(yàn)，有可能出現(xiàn)菌體不夠用的情況（通常每挑一下接種后，要進(jìn)行燒環(huán)滅菌再進(jìn)行下一次挑菌，浪費(fèi)較多）。

  上面兩種情況，無論是為了得到新鮮菌體，還是為了得到較純的菌落，都需要在營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行劃線培養(yǎng)。所以這是菌種生化鑒定前首先要做的準(zhǔn)備工作，直接使用初篩菌，試驗(yàn)結(jié)果可能會有一些差異，造成誤判（如圖1）。

圖1 使用純化菌（左）和初篩菌（右）接種鑒定條培養(yǎng)結(jié)果的差異

2、接種鑒定條時，一定要用菌懸液來接種嗎？

  鑒定條說明書中要求“取一內(nèi)盛2mL無菌水或無菌生理鹽水試管，用接種針挑取純化菌落至無菌水中仔細(xì)研磨制成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木患?xì)菌懸液，每孔滴入100mL菌懸液，其中固體和半固體生化管采用穿剌接種（參考：HBI微生物生化鑒定條 ）”。也就是說要用均勻的菌懸液進(jìn)行接種。這樣要求，是為了盡量使每個孔中接入的菌量相當(dāng)，使各生化反應(yīng)趨于同步。如果使用接種針或接種環(huán)直接挑菌進(jìn)行接種，會導(dǎo)致各個孔中接菌量差別很大，從而導(dǎo)致培養(yǎng)結(jié)果有所差異（如圖2-a、圖2-b）。

圖2-a  用菌懸液接種的試驗(yàn)結(jié)果（氨基酸對照管變黃，正確）

圖2-b  用接種環(huán)挑菌接種的試驗(yàn)結(jié)果（氨基酸對照管紫色，異常）

3、需要每個孔都換槍頭嗎？

  接種過程中，如果能保證每次往培養(yǎng)基孔中滴加菌液時，不會沾染槍頭，則從頭到尾用一個槍頭即可；如果中間出現(xiàn)沾染，則需及時更換槍頭；對于氨基酸和氨基酸對照孔，盡量不用同一個槍頭，以免少量的沾染，影響試驗(yàn)結(jié)果。有的人會執(zhí)意用接種針挑取菌體進(jìn)行接種，這時候更要注意，每接種一個孔，都要進(jìn)行燒環(huán)滅菌，主要是為了清除接種針或接種環(huán)上沾附的少量培養(yǎng)基，以免對后面孔的試驗(yàn)結(jié)果造成干擾。堅(jiān)決不能用一個針挑取菌苔后，連續(xù)往鑒定條的每個孔中一次性接種完成。這樣很可能造成生化結(jié)果的混亂或者試驗(yàn)失敗。

4、討論：

  對于菌種純化，有些標(biāo)準(zhǔn)中也有描述，可以從選擇性培養(yǎng)基平板上挑菌進(jìn)行某項(xiàng)生化試驗(yàn)，如《GB 4789.4  食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)  食品微生物學(xué)檢驗(yàn)  沙門氏菌檢驗(yàn)》中相關(guān)內(nèi)容是這樣描述的：

  但是為了保險，少走彎路，本人還是建議先進(jìn)行純化后，制成菌懸液再進(jìn)行接種、培養(yǎng)。這樣也不會因?yàn)槟骋粌蓚€孔的結(jié)果不好，而再重新使用一整套生化鑒定條，造成浪費(fèi)。文中所列的幾種異常情況，不一定每次都能碰到，但是如果不按正常操作進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)過程中出現(xiàn)各種這樣或那樣異?，F(xiàn)象的幾率會更大，阻礙試驗(yàn)進(jìn)程。

  另外，為了保證結(jié)果的一致性和實(shí)效性，可以將菌液制備得盡量濃一些，也就是說每個孔中接菌量可適當(dāng)加大。

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