国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>技術(shù)參數(shù)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

Western blot 實驗注意事項

來源:上海研謹生物科技有限公司   2025年05月21日 11:10  

Western blot 實驗注意事項

1. 配膠時,建議先加水, 再加Tris-HCL緩沖液,并且每加一種液體就混勻膠液。加入的TEMED有毒,務必在通風櫥中操作, 并且加入后立即混勻、灌膠。丙烯酰胺未聚合的單體有神經(jīng)毒性, 能夠經(jīng)皮膚吸收, 需戴手套操作。

2. AP作為催化劑能夠提供氧自由基促使丙烯酰胺單體聚合, TEMED作為加速劑能夠促進AP釋放氧自由基,加速丙烯酰胺單體的聚合。空氣溫度較低時稍稍多加TEMED可加快膠的凝固速度,但要確保AP未變質(zhì),否則無效。

3. AP應現(xiàn)配現(xiàn)用, 否則變質(zhì)會導致膠不聚合。另外, TEMED添加過量會使膠凝得過快并且孔徑大小不一,影響蛋白的電泳,甚至可能燒膠。

4. 電泳內(nèi)槽中應加入新鮮的電泳液, 并且應先拔梳子再安裝入電泳槽, 添加電泳液。這樣能夠沖洗掉各孔中碎膠, 確保電泳時條帶平直。

5. 建議兩邊加入預染的Protein Marker,方便觀察不同KDa蛋白的分離情況,也方便后續(xù)的裁膜。

6. 電轉(zhuǎn)液中一般需加入甲醇或乙醇, 而電轉(zhuǎn)時的放熱會加速醇類的揮發(fā)進而影響下一次重復使用時的電轉(zhuǎn)效果。重復使用電轉(zhuǎn)液時應考慮到醇類的揮發(fā)而適當延長電轉(zhuǎn)時間, 最好是每次電轉(zhuǎn)時都使用新的電轉(zhuǎn)液。不同KDa的蛋白電轉(zhuǎn)的條件不同, 所以可以針對目的蛋白進行切膠, 然后在不同條件下電轉(zhuǎn)。

7. 蓋上PVDF膜后, 不要再輕易移動, 否則條帶會模糊。兩邊的濾紙不能相互接觸,接觸后會發(fā)生短路,蛋白會轉(zhuǎn)不過來。

8. 封閉常用脫脂奶粉或BSA,建議建議做磷酸化蛋白的western時使用BSA(牛血清蛋白) 作為封閉液。奶粉含有酪蛋白(一種磷酸化蛋白),如果用奶粉,有可能出現(xiàn)背景深的現(xiàn)象。并且脫脂奶粉含磷酸酶, 磷酸酶與膜上的磷酸化蛋白接觸可使之去磷酸化, 用磷酸化特異性抗體分析磷酸化蛋白時會受到影響。

9. 一抗在四度孵育時能夠延緩抗體的衰減速度, 提高重復利用的次數(shù)。建議嚴格按照要求進行洗膜, 不要輕易減少洗膜的次數(shù)和時間。Tween20作為一種非離子表面活性劑, 能夠減少非特異性的抗體結(jié)合, 降低背景。所以如果曝光后發(fā)現(xiàn)背景高,可以將1XPBST/TBSTTween200.05%提高到0.5%,并且增加洗膜次數(shù)。

10. 曝光時盡量將目標蛋白和內(nèi)參一起曝光, 便于比較。如果使用傳統(tǒng)的壓片曝光, 可以壓兩張甚至更多的片子并折角, 折角可以確定方向, 增加壓片數(shù)量可以控制曝光強度。離膜最近的片子記錄亮度低的蛋白條帶的情況, 離膜遠的蛋白可以保證亮度強的蛋白不過曝。

11. 曝光時多使用ECL發(fā)光試劑盒, 注意含量稀少的磷酸化蛋白等可以使用超敏型試劑以增加亮度, 而內(nèi)參等含量較多的蛋白則應使用普通的ECL發(fā)光試劑防止過亮,阻礙曝光。

2011年開始我們致力于在生命科學領(lǐng)域、生物醫(yī)學實驗技術(shù)及論文潤色服務,協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實驗技術(shù)服務:



免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
桓台县| 丹阳市| 辽阳市| 布拖县| 瓮安县| 宁远县| 慈溪市| 阿合奇县| 宜阳县| 神池县| 谷城县| 东城区| 白山市| 齐河县| 嵩明县| 澎湖县| 太康县| 蕲春县| 镇雄县| 庄浪县| 虹口区| 阳新县| 梅州市| 汕头市| 修武县| 宜丰县| 福州市| 泰兴市| 太仓市| 东乌| 北流市| 南安市| 龙井市| 库伦旗| 思南县| 敦煌市| 丹东市| 栖霞市| 剑河县| 沙湾县| 凌海市|