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ITC等溫滴定量熱儀是一種用于測量生物分子相互作用（如酶-底物、抗體-抗原、核酸-配體等）的熱力學(xué)參數(shù)的精密儀器。
以下是ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1. 加載樣品
滴定池（Sample Cell）：
加入受體溶液（如蛋白質(zhì)或核酸溶液）。
注射器（Syringe）：
吸入配體溶液（如底物或抑制劑），確保無氣泡，安裝到注射器模塊。
2. 開始滴定
基線穩(wěn)定：
啟動(dòng)儀器，等待基線穩(wěn)定。
初始滴定：
執(zhí)行一次大體積滴定，觀察信號(hào)響應(yīng)，檢查是否漏液或堵塞。
正式滴定：
按設(shè)定參數(shù)逐滴滴定，記錄每次滴定后的熱量變化。
觀察信號(hào)峰值和回歸基線情況，避免過載或飽和。
3. 數(shù)據(jù)采集
實(shí)時(shí)監(jiān)控：
觀察軟件中的原始滴定曲線，確保信號(hào)正常（如峰形對(duì)稱、無異常噪聲）。
保存數(shù)據(jù)：
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后保存原始數(shù)據(jù)文件，備份至本地或云端。
二、ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)后處理：
1. 清洗儀器
沖洗注射器和滴定池：
用超純水或緩沖液多次沖洗，去除殘留樣品。
拆卸注射器，用專用工具清洗活塞和密封圈，避免堵塞。
干燥與維護(hù)：
擦干儀器表面，定期檢查攪拌子、溫度傳感器和電路連接。
2. 數(shù)據(jù)分析
擬合模型：
使用分析軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。
選擇合適模型（如單一站點(diǎn)結(jié)合模型、多站點(diǎn)模型或異構(gòu)結(jié)合模型）。
參數(shù)提?。?/div>
結(jié)合常數(shù)（Ka）：反映配體與受體的結(jié)合親和力。
焓變（ΔH）：結(jié)合過程的熱量變化（正值為放熱，負(fù)值為吸熱）。
熵變（ΔS）和吉布斯自由能（ΔG）：通過范特霍夫方程計(jì)算。
化學(xué)計(jì)量數(shù)（n）：配體與受體的結(jié)合比例。
3. 結(jié)果驗(yàn)證
重復(fù)實(shí)驗(yàn)：
重復(fù)至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，確保數(shù)據(jù)一致性。
對(duì)照實(shí)驗(yàn)：
設(shè)置空白對(duì)照（如緩沖液滴定緩沖液），排除非特異性信號(hào)。
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