ITC等溫滴定量熱儀是一種用于測量生物分子相互作用(如酶-底物、抗體-抗原、核酸-配體等)的熱力學(xué)參數(shù)的精密儀器。
以下是ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1. 加載樣品
滴定池(Sample Cell):
加入受體溶液(如蛋白質(zhì)或核酸溶液)。
注射器(Syringe):
吸入配體溶液(如底物或抑制劑),確保無氣泡,安裝到注射器模塊。
2. 開始滴定
基線穩(wěn)定:
啟動(dòng)儀器,等待基線穩(wěn)定。
初始滴定:
執(zhí)行一次大體積滴定,觀察信號(hào)響應(yīng),檢查是否漏液或堵塞。
正式滴定:
按設(shè)定參數(shù)逐滴滴定,記錄每次滴定后的熱量變化。
觀察信號(hào)峰值和回歸基線情況,避免過載或飽和。
3. 數(shù)據(jù)采集
實(shí)時(shí)監(jiān)控:
觀察軟件中的原始滴定曲線,確保信號(hào)正常(如峰形對(duì)稱、無異常噪聲)。
保存數(shù)據(jù):
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后保存原始數(shù)據(jù)文件,備份至本地或云端。
二、ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)后處理:
1. 清洗儀器
沖洗注射器和滴定池:
用超純水或緩沖液多次沖洗,去除殘留樣品。
拆卸注射器,用專用工具清洗活塞和密封圈,避免堵塞。
干燥與維護(hù):
擦干儀器表面,定期檢查攪拌子、溫度傳感器和電路連接。
2. 數(shù)據(jù)分析
擬合模型:
使用分析軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。
選擇合適模型(如單一站點(diǎn)結(jié)合模型、多站點(diǎn)模型或異構(gòu)結(jié)合模型)。
參數(shù)提?。?/div>
結(jié)合常數(shù)(Ka):反映配體與受體的結(jié)合親和力。
焓變(ΔH):結(jié)合過程的熱量變化(正值為放熱,負(fù)值為吸熱)。
熵變(ΔS)和吉布斯自由能(ΔG):通過范特霍夫方程計(jì)算。
化學(xué)計(jì)量數(shù)(n):配體與受體的結(jié)合比例。
3. 結(jié)果驗(yàn)證
重復(fù)實(shí)驗(yàn):
重復(fù)至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn),確保數(shù)據(jù)一致性。
對(duì)照實(shí)驗(yàn):
設(shè)置空白對(duì)照(如緩沖液滴定緩沖液),排除非特異性信號(hào)。
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