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ITC等溫滴定量熱儀正確使用步驟

來(lái)源:TA儀器   2025年05月26日 15:50  
  ITC等溫滴定量熱儀是一種用于測(cè)量生物分子相互作用(如酶-底物、抗體-抗原、核酸-配體等)的熱力學(xué)參數(shù)的精密儀器。
  以下是ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)操作步驟:
  1. 加載樣品
  滴定池(Sample Cell):
  加入受體溶液(如蛋白質(zhì)或核酸溶液)。
  注射器(Syringe):
  吸入配體溶液(如底物或抑制劑),確保無(wú)氣泡,安裝到注射器模塊。
  2. 開(kāi)始滴定
  基線穩(wěn)定:
  啟動(dòng)儀器,等待基線穩(wěn)定。
  初始滴定:
  執(zhí)行一次大體積滴定,觀察信號(hào)響應(yīng),檢查是否漏液或堵塞。
  正式滴定:
  按設(shè)定參數(shù)逐滴滴定,記錄每次滴定后的熱量變化。
  觀察信號(hào)峰值和回歸基線情況,避免過(guò)載或飽和。
  3. 數(shù)據(jù)采集
  實(shí)時(shí)監(jiān)控:
  觀察軟件中的原始滴定曲線,確保信號(hào)正常(如峰形對(duì)稱(chēng)、無(wú)異常噪聲)。
  保存數(shù)據(jù):
  實(shí)驗(yàn)結(jié)束后保存原始數(shù)據(jù)文件,備份至本地或云端。
  二、ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)后處理:
  1. 清洗儀器
  沖洗注射器和滴定池:
  用超純水或緩沖液多次沖洗,去除殘留樣品。
  拆卸注射器,用專(zhuān)用工具清洗活塞和密封圈,避免堵塞。
  干燥與維護(hù):
  擦干儀器表面,定期檢查攪拌子、溫度傳感器和電路連接。
  2. 數(shù)據(jù)分析
  擬合模型:
  使用分析軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。
  選擇合適模型(如單一站點(diǎn)結(jié)合模型、多站點(diǎn)模型或異構(gòu)結(jié)合模型)。
  參數(shù)提取:
  結(jié)合常數(shù)(Ka):反映配體與受體的結(jié)合親和力。
  焓變(ΔH):結(jié)合過(guò)程的熱量變化(正值為放熱,負(fù)值為吸熱)。
  熵變(ΔS)和吉布斯自由能(ΔG):通過(guò)范特霍夫方程計(jì)算。
  化學(xué)計(jì)量數(shù)(n):配體與受體的結(jié)合比例。
  3. 結(jié)果驗(yàn)證
  重復(fù)實(shí)驗(yàn):
  重復(fù)至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn),確保數(shù)據(jù)一致性。
  對(duì)照實(shí)驗(yàn):
  設(shè)置空白對(duì)照(如緩沖液滴定緩沖液),排除非特異性信號(hào)。
 

 

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