二手羅氏 LightCycler® 96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀系統(tǒng)技術(shù)概述

一、引言

隨著分子診斷和基因研究需求的不斷增長(zhǎng)，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）技術(shù)在科研、臨床檢測(cè)、食品安全、生物制藥等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。PCR儀器作為該技術(shù)的核心設(shè)備，具有重要作用。在設(shè)備選型中，部分實(shí)驗(yàn)室選擇使用二手儀器作為過(guò)渡或擴(kuò)容方案，以控制成本并維持實(shí)驗(yàn)效率。

羅氏（Roche）推出的 LightCycler® 96 是一款廣泛應(yīng)用于科研和基礎(chǔ)檢測(cè)領(lǐng)域的中通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。其二手設(shè)備在功能結(jié)構(gòu)、操作流程等方面基本保持完整，并在技術(shù)指標(biāo)滿(mǎn)足要求的前提下，仍可繼續(xù)在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)環(huán)境中發(fā)揮作用。本文將從儀器構(gòu)造、功能特點(diǎn)、使用優(yōu)勢(shì)、適用范圍、選購(gòu)建議等方面，全面介紹二手 LightCycler® 96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)。

二、設(shè)備概況

LightCycler® 96 是羅氏分子系統(tǒng)產(chǎn)品線(xiàn)中的一款96孔qPCR平臺(tái)，設(shè)計(jì)理念偏向通用性和穩(wěn)定性，適用于中小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室的日常基因定量任務(wù)。該設(shè)備集成了精準(zhǔn)溫控系統(tǒng)、四通道熒光檢測(cè)模塊以及數(shù)據(jù)分析平臺(tái)，可支持常見(jiàn)的SYBR Green、TaqMan探針等反應(yīng)體系。

主要技術(shù)參數(shù)如下：

三、構(gòu)造與工作原理

1. 溫控系統(tǒng)

設(shè)備采用雙向帕爾貼（Peltier）技術(shù)，通過(guò)閉環(huán)反饋控制，確保PCR反應(yīng)過(guò)程中的溫度均一性與重現(xiàn)性。熱蓋系統(tǒng)自動(dòng)壓緊，防止樣品蒸發(fā)，提升反應(yīng)效率。

2. 熒光檢測(cè)模塊

光學(xué)系統(tǒng)具備四個(gè)獨(dú)立檢測(cè)通道，采用精密濾光片與光電探測(cè)器分光讀取熒光強(qiáng)度，可實(shí)時(shí)監(jiān)控多重?cái)U(kuò)增反應(yīng)的熒光信號(hào)，適用于雙通道或多通道實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

3. 控制與數(shù)據(jù)分析

配套 LightCycler® 96 軟件支持：

• 擴(kuò)增曲線(xiàn)和熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)可視化；

• Ct值自動(dòng)判讀；

• 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法、ΔΔCt法、相對(duì)/絕對(duì)定量分析；

• 熔解曲線(xiàn)分析，判斷引物特異性。

四、二手設(shè)備使用價(jià)值分析

1. 經(jīng)濟(jì)性

二手LightCycler® 96 儀器通常原價(jià)50%甚至更多，對(duì)于預(yù)算有限的實(shí)驗(yàn)室是一種可行的擴(kuò)展選擇。若由正規(guī)渠道回收、翻新并經(jīng)校準(zhǔn)檢測(cè)，設(shè)備仍可提供穩(wěn)定的數(shù)據(jù)輸出。

2. 適用性

二手設(shè)備在功能模塊完整、光學(xué)系統(tǒng)正常、溫控系統(tǒng)穩(wěn)定的前提下，可應(yīng)用于以下任務(wù)：

• RNA逆轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)定量；

• 病原體DNA/RNA的檢測(cè)；

• 突變篩查與多態(tài)性分析；

• 食品和水質(zhì)中污染物的分子檢測(cè)；

• 藥物代謝基因分型研究。

3. 軟件兼容性

配套軟件無(wú)需訂閱費(fèi)用，支持在主流Windows操作系統(tǒng)下運(yùn)行，兼容xlsx、csv、txt等格式數(shù)據(jù)導(dǎo)出，便于進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析或整合到LIMS系統(tǒng)中。

五、二手設(shè)備選購(gòu)與使用注意事項(xiàng)

1. 購(gòu)買(mǎi)渠道與檢測(cè)報(bào)告

建議通過(guò)有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備供應(yīng)商采購(gòu)，要求提供設(shè)備來(lái)源、校準(zhǔn)報(bào)告、檢測(cè)報(bào)告、功能測(cè)試記錄，以及操作說(shuō)明書(shū)等完整資料。避免通過(guò)非正規(guī)途徑購(gòu)入未經(jīng)檢測(cè)的設(shè)備，存在數(shù)據(jù)不穩(wěn)定或電氣故障等隱患。

2. 外觀(guān)與結(jié)構(gòu)檢查

• 儀器應(yīng)無(wú)明顯磕碰或變形；

• 內(nèi)部托盤(pán)無(wú)銹蝕或污染；

• 光路模塊無(wú)損壞、無(wú)灰塵遮蔽；

• 顯示屏、端口、按鈕正常運(yùn)行。

3. 功能測(cè)試建議

建議進(jìn)行以下項(xiàng)目測(cè)試：

• 各通道熒光采集準(zhǔn)確性；

• 溫度梯度測(cè)試（96孔溫控均勻性）；

• 實(shí)驗(yàn)復(fù)現(xiàn)性測(cè)試（3次重復(fù)反應(yīng)Ct值標(biāo)準(zhǔn)差≤0.2）；

• 軟件運(yùn)行穩(wěn)定性。

4. 易損件更換與保養(yǎng)

常見(jiàn)易損件包括熱蓋密封圈、光源模塊、風(fēng)扇等。建議定期檢查并更換，以延長(zhǎng)設(shè)備使用壽命。設(shè)備應(yīng)在通風(fēng)干燥環(huán)境中使用，避免強(qiáng)光、濕氣、高溫影響。

六、典型應(yīng)用實(shí)例

1. 科研實(shí)驗(yàn)室

某高校生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室購(gòu)入一臺(tái)二手LightCycler® 96用于課題組日?；虮磉_(dá)檢測(cè)。經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)后，該設(shè)備可穩(wěn)定運(yùn)行，配合自制SYBR體系完成對(duì)植物轉(zhuǎn)基因株系的篩選與分析。

2. 醫(yī)院檢驗(yàn)科

在病原體篩查方面，一些社區(qū)醫(yī)院通過(guò)采購(gòu)二手qPCR設(shè)備構(gòu)建初步檢測(cè)能力，對(duì)常見(jiàn)呼吸道病毒、HPV、人類(lèi)皰疹病毒等進(jìn)行初篩，隨后送樣至上級(jí)醫(yī)院進(jìn)一步確診。

3. 食品企業(yè)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室

某食品企業(yè)為檢測(cè)成品中是否存在非法添加物質(zhì)（如動(dòng)物源成分、轉(zhuǎn)基因成分），購(gòu)置了二手LightCycler® 96 配合商業(yè)試劑盒，開(kāi)展日常抽檢和留樣復(fù)測(cè)。

七、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

八、發(fā)展趨勢(shì)與選型建議

隨著數(shù)字PCR、微流控PCR等新技術(shù)的發(fā)展，傳統(tǒng)qPCR平臺(tái)逐漸融合更多自動(dòng)化與微型化元素。然而，在預(yù)算有限、應(yīng)用任務(wù)穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景中，二手LightCycler® 96 仍具備實(shí)用價(jià)值。建議在以下情況下考慮采購(gòu)：

• 實(shí)驗(yàn)室為教學(xué)或科研用途，對(duì)通量要求不高；

• 僅用于標(biāo)準(zhǔn)化重復(fù)實(shí)驗(yàn)，不涉及高通量篩查；

• 可配合已有反應(yīng)體系與試劑平臺(tái)，形成閉環(huán)工作流程。

九、總結(jié)

二手羅氏 LightCycler® 96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀作為一款技術(shù)成熟、操作簡(jiǎn)便的中通量qPCR平臺(tái)，若維護(hù)得當(dāng)，仍可在常規(guī)分子生物學(xué)研究及基礎(chǔ)檢測(cè)中發(fā)揮良好作用。對(duì)于實(shí)驗(yàn)室預(yù)算有限、檢測(cè)需求明確的單位，合理選購(gòu)并科學(xué)使用二手設(shè)備，是提升實(shí)驗(yàn)效能、優(yōu)化資源配置的一種現(xiàn)實(shí)路徑。