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基質(zhì)膠應(yīng)用(1) —皮下成瘤實(shí)驗(yàn)全攻略
導(dǎo) 語(yǔ)
想評(píng)估抗癌藥物療效？研究腫瘤生長(zhǎng)機(jī)制？皮下成瘤實(shí)驗(yàn)是腫瘤研究中的經(jīng)典模型！但如何規(guī)范操作確保實(shí)驗(yàn)成功率？需要哪些關(guān)鍵試劑？本文為您一一解析！
皮下成瘤（Subcutaneous Tumorigenesis）是將腫瘤細(xì)胞接種到小鼠皮下，模擬腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｒ蚱洳僮骱?jiǎn)便、成瘤周期短、可視化強(qiáng)，被廣泛用于：
? 抗腫瘤藥物療效評(píng)價(jià)；
? 腫瘤發(fā)生機(jī)制研究；
? 免疫治療及基因治療開(kāi)發(fā)。
準(zhǔn)備對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的、細(xì)胞密度達(dá)80 - 90%左右的HepG2細(xì)胞，于收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
胰酶消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓未脫離培養(yǎng)皿時(shí)，去除胰酶，加入PBS/無(wú)血清培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，離心清洗一次，重懸至終濃度為1×108個(gè)細(xì)胞/mL。
將細(xì)胞懸液和Ceturegel™高濃度基質(zhì)膠在4℃環(huán)境下按1:1比例進(jìn)行稀釋?zhuān)苽涑山K濃度為5×107個(gè)細(xì)胞/mL（Ceturegel™基礎(chǔ)濃度基質(zhì)膠建議濃度在70%以上）。
左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩處皮下注射，接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1 cm深，以減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出，接種體積為200 μL。(這一過(guò)程盡量在半小時(shí)內(nèi)完成，途中細(xì)胞懸液放在冰上以減緩細(xì)胞凋亡及防止出現(xiàn)凝膠現(xiàn)象）。
將裸鼠放回籠內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng)，1周~1月左右可看到腫瘤出現(xiàn)，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在腫瘤體積達(dá)到要求時(shí)對(duì)裸鼠進(jìn)行安樂(lè)si，并拍照。
常見(jiàn)的荷瘤不成功可能的原因？
① 細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá) 80 - 90% 左右密度為宜，收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
② 可能是小鼠周齡太大，一般選擇 4 - 6 周齡裸鼠，小于 4 周可能不耐受過(guò)早死亡，大于 6 周免疫力會(huì)增強(qiáng)，不易成瘤。
③ 可能是小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠。
④ 接種部位也是成瘤實(shí)驗(yàn)的重要因素。選擇血管豐富且易操作的部位接種，如腋下、腹股溝、側(cè)腹部及頸背部等部位，其中腋下中后部皮下較好，成瘤率高，比較推薦打腋下，一人操作很方便，后續(xù)量瘤子也很好操作。
腫瘤長(zhǎng)起來(lái)后又消失的原因？
腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中，如果出現(xiàn)腫瘤塊先縮小，后變大的現(xiàn)象，很可能是由于炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收造成的。繼續(xù)觀(guān)察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否經(jīng)過(guò)幾周還能長(zhǎng)出來(lái)，如若后續(xù)腫瘤依舊未長(zhǎng)出來(lái)，可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40187ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL |
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red胰酶溶液（0.25%），含酚紅 | 40126ES | 100 mL |
PBS(1×)細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) | 41403ES | 500 mL |
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