無菌技術(shù)主要包括

1、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒;

2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種的用具和培養(yǎng)基等進行滅菌;

3、為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行，

4、實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸

一、倒平板

1、培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50℃左右時才能倒平板。

2、左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要打開。

3、整個操作在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。

4、平板冷卻后要倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。

5、若倒平板時，培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板應(yīng)丟棄。

二、平板劃線操作

次劃線及每次劃線之前都要灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的總結(jié)如下表：

1、將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅;2、在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞;

3、將試管口通過火焰;4、將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液;

4、將試管口通過火焰，并塞上棉塞;6、左手將皿蓋打開條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。

7、灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將-區(qū)域的劃線與-區(qū)相連。8、將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、稀釋涂布平板

1、稀釋操作時：

每支試管及其中9mL水、移液管均需滅菌；操作時，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1－2cm處。

2、涂布平板時：

①涂布器用70％酒精消毒，取出時，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。

②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。

③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管頭不要接觸任何物體。

三、擺斜面

裝在試管中的瓊脂培養(yǎng)基，在滅菌完成后，趁熱立即擺放在木棒（或玻璃棒）上，并成適當?shù)男倍?，冷卻后，瓊脂凝固即成斜面。斜面長度不用超過試管二分之一。

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