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凝膠滲透色譜是基于分子尺寸差異進(jìn)行分離的

來源:上海杜凱生物科技有限公司   2025年06月03日 15:23  
  凝膠滲透色譜基于分子尺寸差異進(jìn)行分離。色譜柱中填充多孔性凝膠顆粒,這些顆粒具有特定孔徑范圍。當(dāng)樣品溶液流經(jīng)色譜柱時(shí),較大尺寸的分子無法進(jìn)入凝膠孔隙,只能沿著凝膠顆粒間的空隙快速通過色譜柱,在柱中停留時(shí)間較短;而較小尺寸的分子能夠進(jìn)入凝膠孔隙內(nèi)部,其流動(dòng)路徑變長(zhǎng),在柱中停留時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng),從而實(shí)現(xiàn)不同大小分子的分離。
 
  常用的凝膠有交聯(lián)聚苯乙烯凝膠等。以交聯(lián)聚苯乙烯凝膠為例,其具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性,能在多種有機(jī)溶劑中使用,并且具有合適的孔徑分布,可實(shí)現(xiàn)對(duì)不同分子量范圍聚合物的有效分離。凝膠的孔徑大小決定了可進(jìn)入凝膠內(nèi)部的分子尺寸上限,通過選擇合適孔徑的凝膠,能夠針對(duì)性地分離特定分子量范圍的樣品。
 
  凝膠滲透色譜儀操作步驟:
 
  1.樣品準(zhǔn)備:將待分析的樣品溶解在合適的溶劑中,制備成一定濃度的溶液。溶劑的選擇需考慮樣品的溶解性以及與凝膠色譜柱的兼容性,常用的溶劑有四氫呋喃、氯仿等。樣品溶液需經(jīng)過過濾或離心等預(yù)處理步驟,以去除其中的雜質(zhì)和顆粒物,防止堵塞色譜柱。
 
  2.色譜條件設(shè)置:根據(jù)樣品的性質(zhì)和分析要求,設(shè)置合適的流動(dòng)相流速、柱溫等色譜條件。一般來說,較低的流速有利于提高分離效果,但會(huì)延長(zhǎng)分析時(shí)間;較高的柱溫可加快分子在凝膠中的擴(kuò)散速率,縮短分析時(shí)間,但可能會(huì)影響某些樣品的穩(wěn)定性和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
 
  3.進(jìn)樣分析:使用進(jìn)樣器將處理好的樣品溶液注入色譜柱中,啟動(dòng)輸液泵,使流動(dòng)相攜帶樣品在色譜柱中進(jìn)行分離。在分離過程中,檢測(cè)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)并記錄樣品的濃度變化,得到色譜圖。
 
  4.數(shù)據(jù)處理:對(duì)得到的色譜圖進(jìn)行分析處理,通過積分峰面積、測(cè)定保留時(shí)間等數(shù)據(jù),結(jié)合已知標(biāo)準(zhǔn)樣品的數(shù)據(jù)或相關(guān)計(jì)算公式,可確定樣品的分子量分布、分子量平均值等信息。例如,根據(jù)色譜圖中不同峰對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間和已知標(biāo)準(zhǔn)曲線,可計(jì)算出各組分的分子量,進(jìn)而得到樣品的數(shù)均分子量、重均分子量等參數(shù)。
凝膠滲透色譜

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