前 言

2025年版《中國藥典》將于10月1日起正式實(shí)施，在生物制品質(zhì)量控制及病毒安全性評(píng)價(jià)方面做出了關(guān)鍵修訂，對(duì)推動(dòng)生物醫(yī)藥行業(yè)發(fā)展十分重要。

在保持與國際接軌的同時(shí)，基于WHO、ICH等國際相關(guān)指導(dǎo)原則的變化趨勢，結(jié)合我國生物制品發(fā)展的需求，“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”部分被拆分為兩部分：“生物制品生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制（通則0234）”和“生物制品檢定用動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)量控制（通則0235）”。

通則0234首-次新增昆蟲細(xì)胞的適用范圍，加入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估策略，優(yōu)化細(xì)胞庫檢定項(xiàng)目，并在傳統(tǒng)檢測方法基礎(chǔ)上新增病毒核酸擴(kuò)增方法或NGS（下一代測序或高通量測序）法作為補(bǔ)充或替代的內(nèi)容，提升檢測的科學(xué)性、合理性和安全性。

通則0235在2020年版版藥典內(nèi)容基礎(chǔ)上，新增了針對(duì)特定基因修飾細(xì)胞的具體檢測要求，涵蓋構(gòu)建過程、特征鑒別、使用代次內(nèi)穩(wěn)定性等方面，滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展需要。

為更好的遵循監(jiān)管要求進(jìn)行藥品的研制、生產(chǎn)和質(zhì)量管理，義翹神州將與大家一起對(duì)2025年版《中國藥典》“通則0234”和“通則0235”的變化進(jìn)行詳細(xì)解讀。今天我們先解讀“細(xì)胞檢定”項(xiàng)目要求的變化。

注：以下內(nèi)容中，綠色字體表示更改內(nèi)容，紅色字體為新增內(nèi)容。

一、細(xì)胞檢定項(xiàng)目要求的總體變化與解讀

1細(xì)胞檢定

2025年版藥典：細(xì)胞檢定主要包括以下幾個(gè)方面：細(xì)胞鑒別、外源因子和內(nèi)源因子的檢查、成瘤性/致瘤性檢查等。必要時(shí)還須進(jìn)行細(xì)胞生長特性、細(xì)胞染色體檢查、細(xì)胞均一性及穩(wěn)定性檢查。這些檢測內(nèi)容對(duì)于MCB細(xì)胞和WCB細(xì)胞、生產(chǎn)終末細(xì)胞（EOPC）或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞均適用。

修改說明：增加生產(chǎn)限定代次細(xì)胞可代替生產(chǎn)終末細(xì)胞（EOPC）

2細(xì)胞檢定項(xiàng)目要求

2025年版藥典：應(yīng)對(duì)細(xì)胞來源、培養(yǎng)及建庫過程進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并制定檢定策略。通常應(yīng)至少對(duì)MCB細(xì)胞及EOPC細(xì)胞或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞進(jìn)行一次全面檢定， WCB細(xì)胞進(jìn)行部分檢定。如對(duì)MCB細(xì)胞不能進(jìn)行全面檢定，可對(duì)首-個(gè)WCB細(xì)胞進(jìn)行全面檢定，后續(xù)建立的WCB細(xì)胞可通過評(píng)估后進(jìn)行部分檢定。當(dāng)生產(chǎn)工藝發(fā)生變更時(shí)，需經(jīng)評(píng)估，必要時(shí)應(yīng)重新對(duì)EOPC細(xì)胞或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞進(jìn)行檢測。細(xì)胞檢定的基本要求見表1。

修改說明：

1. 增加需根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估制定檢定策略；

2. 增加生產(chǎn)限定代次細(xì)胞可替代EOPC進(jìn)行全檢；

3. 增加首-個(gè)WCB全檢可替代MCB

4. 增加生產(chǎn)工藝變更時(shí)，可經(jīng)評(píng)估是否重新檢測。

解讀：

· 檢定策略制定中引入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的理念

· 明確了主庫、工作庫的檢定策略

· 某些細(xì)胞治療產(chǎn)品（干細(xì)胞、CAR-T細(xì)胞等）MCB數(shù)量是有限的，進(jìn)行WCB全檢對(duì)樣品量具有挑戰(zhàn)性，可首-個(gè)WCB全檢替代MCB

· 不是所有的工藝變更都要復(fù)檢EOPC，需要經(jīng)過評(píng)估后確定是否需要復(fù)檢

表1：細(xì)胞檢定的基本要求

注：“+”為必檢項(xiàng)目，“-”為非強(qiáng)制檢定項(xiàng)目，（+）表示需要根據(jù)細(xì)胞特性、傳代歷史、培養(yǎng)過程等情況評(píng)估后進(jìn)行的檢定項(xiàng)目。

a. EOPC，是指達(dá)到或超過生產(chǎn)末期時(shí)收獲的細(xì)胞，盡可能取按生產(chǎn)規(guī)模制備的生產(chǎn)末期細(xì)胞。

b. 對(duì)分枝桿菌易感的細(xì)胞進(jìn)行該項(xiàng)檢查。

c. 根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果確定是否進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，如在建庫或細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在外源因子引入的風(fēng)險(xiǎn)，可進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)或用經(jīng)驗(yàn)證的NGS法替代。

d. 從MCB或WCB復(fù)蘇細(xì)胞，擴(kuò)增至或超過生產(chǎn)用細(xì)胞齡限制代次作為待檢樣本。

修改說明：

1. 增加生產(chǎn)限定代次細(xì)胞（LIVCA）可替代EOPC

2. 更改EOPC/LIVCA細(xì)胞鑒別為必檢項(xiàng) 

3. 新增螺原體檢查 

4. 刪除細(xì)胞形態(tài)觀察及血吸附試驗(yàn)

5. 更改MCB及EOPC/LIVCA動(dòng)物和雞胚體內(nèi)接種法為可選項(xiàng)，且可用經(jīng)驗(yàn)證的NGS方法替代 

6. 刪除染色體檢查，染色體檢查作為新建二倍體細(xì)胞的檢測項(xiàng)目，不放在細(xì)胞基質(zhì)總的檢定要求

7. 更改EOPC/LIVCA成瘤性檢查為可選項(xiàng) 

8. 增加成瘤性/致瘤性檢查待檢樣本要求

9. 增加穩(wěn)定性檢查，為可選項(xiàng)（原為重組細(xì)胞的特殊要求，現(xiàn)調(diào)整至此處）

二、細(xì)胞檢定項(xiàng)目及方法的變化與解讀

1細(xì)胞鑒別

2025年版藥典：細(xì)胞庫（MCB和WCB）和生產(chǎn)終末細(xì)胞或生產(chǎn)限定代次細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，以確認(rèn)所用細(xì)胞正確，且無其他細(xì)胞的交叉污染。重組細(xì)胞系的專屬特性的鑒別，還應(yīng)通過檢測目的蛋白基因或目的蛋白進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。細(xì)胞鑒別試驗(yàn)方法有多種，包括細(xì)胞形態(tài)、生物化學(xué)法（如同工酶試驗(yàn)）、免疫學(xué)檢測（如組織相容性抗原、種特異性免疫血清）、細(xì)胞遺傳學(xué)檢測（如染色體核型、標(biāo)記染色體檢測）、遺傳標(biāo)志檢測［如DNA指紋圖譜，包括短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）、限制片段長度多態(tài)性（RFLP PCR）和內(nèi)含子多態(tài)性（EPIC-PCR）法等］以及其他方法（如雜交法、PCR法、報(bào)告基因法等）。應(yīng)至少選擇上述一種或幾種方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行種屬和細(xì)胞株間及專屬特性的鑒別。種屬鑒別可依法檢查（通則 3430）。

修改說明：

1. 刪除“新建細(xì)胞系/株的鑒別要求”

2. 更改鑒別試驗(yàn)結(jié)果“確認(rèn)為本細(xì)胞”為“確認(rèn)所用細(xì)胞正確”

3. 更改重組細(xì)胞系的專屬特性鑒別要求的位置

4. 增加種屬鑒別依通則3430檢查

解讀：

· 種屬鑒別法（通則3430），內(nèi)容均為分子類方法，并提到傳統(tǒng)的生物化學(xué)法，如同工酶法，準(zhǔn)確性差，靈敏度低。

2細(xì)菌、真菌檢查

2025年版藥典：分別取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液和凍存細(xì)胞管樣品，依法檢查（通則1101），應(yīng)符合規(guī)定。對(duì)于MCB及WCB培養(yǎng)物，至少取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液10 ml，盡可能采用薄膜過濾法檢測。對(duì)于凍存細(xì)胞，至少取凍存細(xì)胞總支數(shù)的1%或至少2支凍存細(xì)胞管（取量大者），可采用直接接種法檢測。

通則1101

• 制備好的培養(yǎng)基若不及時(shí)使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中，在 2~25℃、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用。

• 培養(yǎng)基無菌性檢查每批隨機(jī)取部分培養(yǎng)基。 

• 方法適用性實(shí)驗(yàn)對(duì)大腸埃希菌敏感的抗生素類產(chǎn)品宜選用大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。

• 培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察并記錄是否有菌生長。

• 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的要求，綜合評(píng)估確定日常檢驗(yàn)過程中陽性對(duì)照試驗(yàn)的必要性。

修改說明：

1. 更改“細(xì)菌、真菌無菌檢查”為“細(xì)菌、真菌檢查”

2. 更改“取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液或凍存細(xì)胞管樣品”為“分別取混合細(xì)胞培養(yǎng)上清液和凍存細(xì)胞管樣品”

3. 培養(yǎng)基不需要避光保存，無菌性檢查對(duì)檢查數(shù)量不做規(guī)定

4. 適用性試驗(yàn)將大腸埃希菌替換為銅綠假單胞菌，但對(duì)大腸埃希菌敏感的抗生素類樣品還需用大腸埃希菌

5. 無菌檢查硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)置于一個(gè)溫度即可

6. 增加了質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的要求，評(píng)估日常檢驗(yàn)中陽性對(duì)照試驗(yàn)的必要性

解讀：

· 需要做細(xì)胞培養(yǎng)上清液和凍存細(xì)胞管兩種樣品

· 與國際方法接軌，硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基減少為一個(gè)培養(yǎng)溫度，陽性對(duì)照無強(qiáng)制要求

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