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軟骨素酶ABC酶解--液相色譜法測(cè)定魚(yú)翅中的透明質(zhì)酸
1.儀器與試劑 配置紫外可見(jiàn)檢測(cè)器的HP-1100型液相色譜儀(美國(guó)惠普公司);DU-600型紫外掃描儀(瑞士Beckman公司);透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸二糖、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、膠原酶、木瓜蛋白酶、軟骨素酶ABC均為Sigman產(chǎn)品;乙腈為色譜純;二次蒸餾水;其他所用試劑均為分析純。 2.色譜條件 色譜柱: ZORBAX 糖分析柱(4.6mmi.d. x 250mm, 5µm);檢測(cè)器及檢測(cè)波長(zhǎng):紫外可見(jiàn)檢測(cè)器,226nm;流動(dòng)相V(乙腈):V(0.5%磷酸)=2:98;用0.45µm濾膜抽吸過(guò)濾;進(jìn)樣量10µL;流速1ml/min;室溫下分析。 3.溶液的配制 透明質(zhì)酸二糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制:準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品,用0.2mol<LTris-HCl(Ph8.0)緩沖溶液溶解,稀釋定容為1g/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液,于冰箱中存放。實(shí)驗(yàn)時(shí),其他濃度的標(biāo)準(zhǔn)液均由此溶液用0.2mol/L Tris-HCl(Ph8.0)稀釋而成。其他所用溶液均按常規(guī)方法配制而成。
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