原理：通過(guò)物理手段將腫瘤組織分散成單個(gè)細(xì)胞，如用剪刀剪碎、研磨或使用組織勻漿器等。

操作：將腫瘤組織置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用眼科剪將其剪成小塊，再放入勻漿器中，加入適量的緩沖液進(jìn)行研磨，最后通過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾，得到單細(xì)胞懸液。

特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、快速，適用于質(zhì)地較軟的腫瘤組織。但可能會(huì)對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械損傷，影響細(xì)胞活性和完整性。

原理：利用蛋白酶等消化酶將腫瘤組織中的細(xì)胞外基質(zhì)和連接蛋白水解，使細(xì)胞彼此分離。

操作：將腫瘤組織切成小塊，放入含有胰蛋白酶、膠原酶等消化酶的緩沖液中，在適當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間條件下進(jìn)行消化，消化完成后加入含血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng)，最后通過(guò)離心收集細(xì)胞，得到單細(xì)胞懸液。

特點(diǎn)：能有效解離腫瘤組織，獲得較高的細(xì)胞產(chǎn)量和活性。但不同腫瘤組織對(duì)酶的敏感性不同，需要優(yōu)化消化條件，且消化過(guò)度可能會(huì)破壞細(xì)胞表面抗原。

原理：結(jié)合機(jī)械解離和酶消化的優(yōu)點(diǎn)，先對(duì)腫瘤組織進(jìn)行機(jī)械切割，再用酶進(jìn)行消化，以提高細(xì)胞解離效果。

操作：先將腫瘤組織剪成小塊，然后用胰蛋白酶或膠原酶等進(jìn)行消化，消化過(guò)程中可適當(dāng)進(jìn)行輕柔的吹打或振蕩，幫助細(xì)胞分散，最后通過(guò)過(guò)濾和離心得到單細(xì)胞懸液。

特點(diǎn)：可提高細(xì)胞產(chǎn)量和活性，減少細(xì)胞損傷，適用于大多數(shù)腫瘤組織。但操作相對(duì)復(fù)雜，需要嚴(yán)格控制消化時(shí)間和機(jī)械作用強(qiáng)度。

原理：根據(jù)細(xì)胞的密度差異，在密度梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心，使不同密度的細(xì)胞分布在不同的層次，從而分離出單個(gè)細(xì)胞。

操作：將腫瘤組織消化后的細(xì)胞懸液小心地鋪在密度梯度介質(zhì)（如 Ficoll - Hypaque）上，然后進(jìn)行離心。離心后，不同密度的細(xì)胞會(huì)在梯度介質(zhì)中形成不同的條帶，收集所需的細(xì)胞條帶，經(jīng)過(guò)洗滌后即可得到單細(xì)胞懸液。

特點(diǎn)：可有效分離出不同類(lèi)型的細(xì)胞，提高細(xì)胞純度。但需要特殊的密度梯度介質(zhì)和離心設(shè)備，操作過(guò)程較為繁瑣。