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端粒酶活性檢測檢測法的優(yōu)缺點對比

來源:上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司   2025年06月17日 14:05  


端粒酶活性和催化亞基hTERT基因表達(dá)量作為重要的腫瘤標(biāo)志物,與90%惡性腫瘤呈正相關(guān),可應(yīng)用于干細(xì)胞成瘤性快檢。中檢院在進(jìn)行干細(xì)胞制品質(zhì)量復(fù)核時,也是進(jìn)行端粒酶活性檢查,采用端粒酶活性(TRAP法)和hTERT基因表達(dá)量的方法,這兩種方法的檢測結(jié)果是一致的。   

1. 直接檢測法(如TRAP法及其衍生技術(shù))

優(yōu)點:

直接檢測端粒酶活性:通過延伸端粒重復(fù)序列(TTAGGG)來反映端粒酶的生物學(xué)功能,是端粒酶活性檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

廣泛應(yīng)用TRAP法是經(jīng)典方法,經(jīng)過多年優(yōu)化(如RQ-TRAP、TRAP-ELISA等),在科研和臨床中有較多文獻(xiàn)支持。

缺點:

操作復(fù)雜:需抽提蛋白、端粒酶延伸反應(yīng)、PCR擴增(QPCR/電泳/雜交)等多步驟,耗時耗力,技術(shù)難度高。

穩(wěn)定性差:樣本處理(如蛋白提?。┮讓?dǎo)致端粒酶失活,影響結(jié)果可靠性。

靈敏度與特異性不足SYBR Green法引物特異性較差,易產(chǎn)生非特異性擴增;ELISA法重復(fù)性不佳,易受干擾;低豐度樣本(如少量腫瘤細(xì)胞)檢測受限。

2. 間接檢測法(如hTERT基因表達(dá)檢測,Biowing試劑盒為代表)

優(yōu)點:

操作簡便:無需蛋白提取和延伸反應(yīng),直接檢測hTERT mRNA表達(dá),步驟少、耗時短。

高靈敏度與穩(wěn)定性:雙色熒光TaqMan探針法特異性強,優(yōu)于SYBR Green;兩套檢測系統(tǒng)信號放大,靈敏度更高(尤其對低表達(dá)樣本);結(jié)果重復(fù)性好,受樣本處理影響小。

配套完善:提供陽性和陰性對照標(biāo)準(zhǔn)品,支持定性和定量分析。

技術(shù)成熟:適用于高通量篩查。

缺點:

間接反映活性依賴PCR技術(shù),需嚴(yán)格防止RNA降解。

總結(jié)對比

 

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