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為了長期保存Jurkat細胞可以采用凍存方法

來源:武漢尚恩生物技術有限公司   2025年06月18日 09:11  
  Jurkat細胞主要用于研究急性T細胞白血病的發(fā)病機制、病理過程等。由于它源自急性T細胞白血病患者,其細胞特性與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關,為研究人員提供了良好的體外模型,有助于深入了解白血病細胞的增殖、分化異常以及相關基因表達變化等情況。由于該細胞具有T細胞的相關特性,能夠支持HIV的感染和復制,科研人員可以利用它來篩選抗HIV藥物,研究HIV與宿主細胞之間的相互作用,探索HIV感染后免疫系統(tǒng)的變化規(guī)律等。
 
  Jurkat細胞的培養(yǎng)與操作注意事項:
 
  -培養(yǎng)條件:需要在特定的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),一般為RPMI -1640培養(yǎng)基,并添加10的胎牛血清(FBS),以保證細胞的生長和增殖所需的營養(yǎng)物質和生長因子。同時,要維持適宜的溫度(通常為37℃)、二氧化碳濃度(一般為5)和濕度等環(huán)境條件。
 
  -傳代操作:傳代時需要注意適當?shù)谋壤话惆凑?:3的比例進行傳代,避免細胞密度過高或過低影響細胞的生長狀態(tài)。在操作過程中,要嚴格遵循無菌操作原則,防止細菌、真菌等污染,因為一旦細胞被污染,可能會影響實驗結果的準確性,甚至導致細胞系的特性發(fā)生改變。
 
  -凍存與復蘇:為了長期保存,可以采用凍存的方法。凍存時需要使用合適的凍存液,一般包含DMSO等成分,以保護細胞在低溫下的存活。復蘇時要注意快速融化,并及時更換新鮮的培養(yǎng)基,讓細胞適應新的生長環(huán)境。
 
  Jurkat細胞的測定步驟:
 
  1.細胞培養(yǎng)與準備
 
  -細胞復蘇:從液氮或-80℃冰箱中取出凍存管,迅速放入37℃水浴鍋中,輕輕搖動使其快速融化。在超凈工作臺中,將融化的細胞懸液轉移到含有預熱培養(yǎng)基的離心管中,離心去除凍存液,然后接種到培養(yǎng)瓶中,加入適量培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中。
 
  -細胞計數(shù):當細胞生長至一定密度時,取適量細胞懸液,用血細胞計數(shù)板或自動化細胞計數(shù)儀進行細胞計數(shù),以確定細胞濃度。
 
  2.具體實驗測定
 
  -流式細胞術胞內染色:計數(shù),每個樣品取2×10?的細胞于無血清的RPMI培養(yǎng)基,37℃ Rest處理1h。每組實驗分為0min/2min/5min的樣,分別用100μl的PBS重懸,轉移到96孔板。刺激物和細胞置于37℃水浴鍋或者金屬浴5min預熱。加入50μl的3×刺激物,37℃孵育固定時間點后快速加入200μl 4 PFA終止刺激并固定細胞,輕微吹吸避免細胞聚團,37℃處理15min。
 
  -細胞增殖檢測:例如利用CCK-8實驗檢測增殖水平時,將不同濃度的藥物或刺激物與Jurkat細胞共同培養(yǎng)24h或48h,然后加入CCK-8試劑,繼續(xù)培養(yǎng)一段時間,用酶標儀測定吸光度,以評估細胞增殖情況。

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