腺相關(guān)病毒（AAV）具有低致病性、低免疫原性、高基因遞送能力，作為病毒載體廣泛用于基因治療領(lǐng)域。基于AAV載體的基因治療也是美國(guó)和歐洲獲批的體內(nèi)基因療法。

圖1 AAV治療

AAV載體有多種優(yōu)勢(shì)，如：野生型的AAV未引發(fā)任何疾?。籄AV在多種細(xì)胞中都能實(shí)現(xiàn)有效載荷的長(zhǎng)期表達(dá)；AAV不具有強(qiáng)免疫原性等。目前超70%基因遞送藥物均采用AAV載體遞送，尤其適用于肝臟、視網(wǎng)膜和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等組織。

AAV2

根據(jù)病毒衣殼蛋白的表面抗原差異進(jìn)行分類，已發(fā)現(xiàn)數(shù)十種不同衣殼蛋白的AAV，不同的AAV具有不同的衣殼蛋白空間結(jié)構(gòu)、序列和組織特異性。這些血清型在體內(nèi)產(chǎn)生不同的抗血清類型。

圖2 AAV三維結(jié)構(gòu), BCRF PDB ID: 1LP3

其中AAV2是最常見(jiàn)的血清型，與其他血清型的氨基酸序列相似性較高，目前幾乎所有的重組AAV病毒載體的核心骨架都是來(lái)源于AAV2亞型，所以AAV2也是最早被廣泛研究的AAV血清型。

AAV2是一種小型的非包膜病毒，直徑約為20-25nm，屬于I型嗜肺病毒。主要由一個(gè)外殼構(gòu)成，這個(gè)外殼由60個(gè)亞基組建而成，主要包含三種多肽VP1、VP2和VP3，共同組成了一個(gè)能夠保護(hù)其內(nèi)部遺傳物質(zhì)的外殼結(jié)構(gòu)，。

AAV2能夠有效轉(zhuǎn)導(dǎo)多種細(xì)胞類型，低免疫原性使得在體內(nèi)表達(dá)可以持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和廣泛的組織特異性使其成為傳遞修復(fù)基因至特定細(xì)胞的理想載體，已超過(guò)200項(xiàng)AAV相關(guān)的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行或即將完成。如：重組人5型腺相關(guān)病毒注射液（H101）是中國(guó)目前獲得批準(zhǔn)的溶瘤病毒的藥物，主要用于治療無(wú)法切除或術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者；腺相關(guān)病毒載體OBP-301通過(guò)瘤內(nèi)注射，聯(lián)合免疫治療食管癌，已進(jìn)入Ⅰ期臨床階段；腺相關(guān)病毒載體AdVince通過(guò)瘤內(nèi)注射治療神經(jīng)內(nèi)分泌瘤，目前處于Ⅰ/Ⅱa期臨床試驗(yàn)階段。

AAV NAbs

在AAV基因治療中，抗AAV中和抗體（Neutralizing Antibodys, NAbs）與AAV結(jié)合，影響病毒與靶細(xì)胞表面受體結(jié)合，導(dǎo)致顯著降低載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和有效性，直接影響基因治療的效果。另外AAV與NAbs形成的復(fù)合物也可能引起一系列的免疫反應(yīng)，影響基因治療的安全性。

NAbs可以在自然感染AAV后形成，也可能在AAV載體給藥后產(chǎn)生。AAV Nabs可能來(lái)源于患者體內(nèi)預(yù)存的AAV抗體，來(lái)自自然感染導(dǎo)致的免疫記憶或是交叉反應(yīng)性，大約有30-60%的人群體內(nèi)有預(yù)存的中和抗體。亦或是在高劑量或者系統(tǒng)性給藥時(shí)，AAV載體在體內(nèi)可能引發(fā)宿主的免疫反應(yīng)產(chǎn)生Nabs。

篩查AAV NAbs是一個(gè)重要步驟，目前用于檢測(cè)AAV Nabs的主要方法是基于細(xì)胞的檢測(cè)和配體結(jié)合測(cè)定法（間接ELISA或者化學(xué)發(fā)光法），通過(guò)這些方法對(duì)預(yù)存抗體的檢測(cè)、中和試驗(yàn)和總抗體測(cè)定都是確?；蛑委熡行院桶踩缘年P(guān)鍵環(huán)節(jié)。

目前已有多項(xiàng)監(jiān)管指南將篩查AAV抗體納入到伴隨診斷檢測(cè)項(xiàng)目中，CDx的上市申請(qǐng)和AAV基因治療的生物制劑許可申請(qǐng)應(yīng)協(xié)調(diào)一致。AAV抗體檢測(cè)在系統(tǒng)性基因治療中至關(guān)重要，它不僅影響治療效果，也是確?；颊甙踩年P(guān)鍵因素。

S-RMab®單克隆抗體

斯達(dá)特開(kāi)發(fā)AAV(intact particle)抗體可識(shí)別特定AAV病毒顆粒構(gòu)象表位，用于定量病毒物理滴度和病毒免疫原性分析（ADA）。在免疫原性分析中，斯達(dá)特AAV抗體可用于抗衣殼蛋白抗體及中和抗體的檢測(cè)，作為陽(yáng)性對(duì)照或在ADA分析中制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

產(chǎn)品名稱：AAV2 (intact particle) Recombinant Mouse mAb (S-R435)       貨號(hào)：S0B0771

AAV2 (intact particle) Recombinant Mouse mAb (S-R435) to be tested were diluted a series of gradients (from 500ng/ml, 2 fold, 9 points) ,and each gradient was co-incubated with AAV2 virus, the mixture was infected with 293T cells after incubation, and RLU luminescence value was detected.