一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞是一種能合成角質(zhì)蛋白的上皮細(xì)胞，此類細(xì)胞為表皮的主體，由表皮深層始逐漸增殖、分化，并在成為角化的角質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞核與細(xì)胞器消失，細(xì)胞亦失去生理功能而脫落。未脫落部分對(duì)機(jī)體尚有保護(hù)作用，故不必在洗擦身體時(shí)用力搓擦，使其過(guò)早脫失。

二、產(chǎn)品信息

平臺(tái)編號(hào)：Bio-133630

規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞信息：NHEK

細(xì)胞名稱：NHEK正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞

產(chǎn)品類別：人源細(xì)胞系

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系：DMEM（高糖）+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

凍存條件：無(wú)血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞描述：本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。

用途：研究

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）

三、細(xì)胞收到后處理方法

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

四、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

3）細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃

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