以下是 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑 的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟（適用于貼壁細(xì)胞），操作前請(qǐng)確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)、核酸純度及實(shí)驗(yàn)條件適配性。

一、試劑準(zhǔn)備

二、 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑操作流程（24孔板為例）

 Day 0: 細(xì)胞鋪板

1. 細(xì)胞計(jì)數(shù)：消化對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整密度。  

2. 鋪板：  

   - 每孔加入 0.5~1×10? cells（貼壁細(xì)胞）  

   - 用 500μL wan-quan培養(yǎng)基（含10%血清+抗生素）培養(yǎng)。  

   - 關(guān)鍵：轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度需達(dá) 70~90% 匯合度（過(guò)度生長(zhǎng)降低效率）。

 Day 1: 轉(zhuǎn)染（耗時(shí)<15分鐘）

> ?? 所有步驟在無(wú)菌環(huán)境（超凈臺(tái)）操作，試劑室溫平衡。

 三、關(guān)鍵優(yōu)化參數(shù)

 四、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟

若轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞（如Jurkat、THP-1）：  

1. 離心收集細(xì)胞 → 重懸于 新鮮培養(yǎng)基（密度 0.5~1×10? cells/mL）。  

2. 按 1mL細(xì)胞懸液 + 混合液（1μg DNA + 2μL jetPRIME） 加入EP管。  

3. 輕柔混勻 → 37℃靜置 15~30分鐘 → 轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)。

 五、 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項(xiàng)

1. 細(xì)胞狀態(tài)：僅用健康、低傳代細(xì)胞（傳代<30）。  

2. 試劑保存：jetPRIME® 4℃避光保存（非-20℃），保質(zhì)期內(nèi)穩(wěn)定。  

3. 避免污染：核酸和Buffer嚴(yán)格無(wú)菌操作。  

4. 毒性處理：若細(xì)胞死亡率高：  

   - ↓ 降低jetPRIME用量（如1μg DNA用1.5μL試劑）  

   - ↓ 縮短轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)時(shí)間（24h后換液）。  

5. 對(duì)照設(shè)置：必設(shè) 空載體對(duì)照組 + 未轉(zhuǎn)染組。

 六、Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑替代方案（特殊情況）

問(wèn)題排查：若效率低 → 檢查核酸純度、細(xì)胞密度、試劑比例；或聯(lián)系 polyplus代理——天津益元利康生物科技有限公司獲取技術(shù)支持。