在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)正以蓬勃之勢快速發(fā)展，成為眾多科研項(xiàng)目及生物制藥研發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)支撐。在體外轉(zhuǎn)錄的復(fù)雜體系中，RNA聚合酶堪稱核心“主角”，其以DNA為模板催化合成互補(bǔ)RNA分子的功能至關(guān)重要。T7、T3與SP6 RNA聚合酶均為常用工具酶，其中T7 RNA聚合酶因具備高效的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)能優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于各類體外轉(zhuǎn)錄場景。而SP6 RNA聚合酶由于高度SP6啟動子序列識別特異性，在精準(zhǔn)轉(zhuǎn)錄方面展現(xiàn)出優(yōu)勢，其與T7 RNA聚合酶形成功能互補(bǔ)，共同為不同科研需求提供差異化解決方案。

圖1. SP6 RNA Polymerase體外轉(zhuǎn)錄流程圖^[1]

SP6 RNA聚合酶是一種DNA依賴型的5'→3' RNA聚合酶，它能夠高度特異性地識別SP6啟動子序列，僅以SP6啟動子下游的DNA為模板，高效催化單鏈或雙鏈DNA SP6啟動子下游NTP（核苷酸三磷酸）的摻入，從而合成與模板DNA互補(bǔ)的RNA鏈。不僅如此，它還能兼容如生物素標(biāo)記、熒光素標(biāo)記等修飾的NTP，為多樣化標(biāo)記RNA的合成提供了可能。憑借自身的特性，SP6 RNA聚合酶在科研與生物技術(shù)領(lǐng)域大顯身手，廣泛應(yīng)用于以下場景：

翌圣SP6 RNA Polymerase (Cat#14810)

圖2. 翌圣SP6 RNA Polymerase與進(jìn)口品牌同類產(chǎn)品SP6 RNA Polymerase以帶有SP6 Promoter的線性化質(zhì)粒DNA為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄時的效果圖

注：分別添加不同酶活SP6 RNA Polymerase與0.1 μg帶有SP6 Promoter的線性化質(zhì)粒DNA為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，37℃孵育2h，70℃孵育10min終止反應(yīng)，加入2U DNase I (10325ES)，37℃孵育15min消化模板DNA，得到的RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為248 nt。取出10 μL反應(yīng)產(chǎn)物，加入5μL 2 × RNA Loading Buffer，70℃變性10min，然后進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，用1X TAE作為電泳液，160V電泳20min，染色后拍照觀察結(jié)果。

圖3. 翌圣SP6 RNA Polymerase核酸外切酶、切口酶、非特異性核酸酶、RNase殘留檢測結(jié)果

注：將SP6 RNA Polymerase分別與核酸底物孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翌圣的3個批次SP6 RNA Polymerase均未檢測出核酸外切酶（100 U）、切口酶（100 U）、非特異性核酸酶（100 U）或RNase（20U）殘留，為您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性與可靠性保駕護(hù)航。