手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
以下是自動聚焦顯微鏡的詳細(xì)操作指南，涵蓋通用流程、進(jìn)階技巧及常見問題處理：
?? 一、基礎(chǔ)操作流程（以生物樣本為例）
開機(jī)準(zhǔn)備
開啟主機(jī)電源，啟動電腦控制軟件（如Olympus cellSens/蔡司ZEN）
安裝合適物鏡（10×觀察定位，40×/100×油鏡精細(xì)聚焦）
載物臺調(diào)平：放置水平校準(zhǔn)玻片，旋轉(zhuǎn)調(diào)平螺絲至液滴不流動
樣本放置與初聚焦
滴浸沒液：油鏡用香柏油，水鏡用蒸餾水（避免氣泡）
粗調(diào)焦旋鈕抬升載物臺，目視下使物鏡逼近樣本（距離≈0.5mm）
切換自動聚焦：軟件點(diǎn)擊AF按鈕或硬件按AF鍵
自動聚焦模式選擇
模式適用場景操作要點(diǎn)
表面反射AF金屬、硅片等反光材料需開啟落射光，強(qiáng)度調(diào)至70%
透射光對比AF細(xì)胞切片、透明薄膜關(guān)閉聚光鏡虹彩光圈至80%孔徑
激光共焦AF厚樣本（>50μm）分層聚焦設(shè)置Z軸步進(jìn)0.5-1μm
參數(shù)優(yōu)化（關(guān)鍵?。?/span>
靈敏度：調(diào)至80-90%（過高易抖動，過低漏檢）
搜索范圍：設(shè)置為預(yù)估焦距±20μm（縮短定位時(shí)間）
聚焦算法：
明場選梯度大化
熒光選強(qiáng)度峰值（避免光漂白）
?? 二、進(jìn)階功能應(yīng)用
多區(qū)域自動聚焦（大樣本拼接）
步驟：
軟件點(diǎn)擊創(chuàng)建網(wǎng)格，劃分5×5掃描區(qū)域
每個(gè)區(qū)域中心點(diǎn)執(zhí)行AF并保存Z坐標(biāo)
啟用曲面擬合生成三維聚焦平面
效果：消除載玻片彎曲誤差，拼接縫隙≤2μm
時(shí)序動態(tài)聚焦（活細(xì)胞觀測）
開啟溫度CO?維持（37℃/5% CO?）
設(shè)置：
聚焦間隔：30秒/次
焦點(diǎn)容差：±0.8μm（避免頻繁調(diào)整）
防漂移技術(shù)：激活硬件閉環(huán)反饋（如蔡司Definite Focus）
三維重建操作
??? 三、日常維護(hù)與校準(zhǔn)
每周維護(hù)
物鏡清潔：用二甲苯-無水乙醇（7：3）混合液擦拭油鏡
載物臺導(dǎo)軌：涂抹真空脂（型號：Krytox GPL205）
校準(zhǔn)：
使用USAF1951分辨率板校驗(yàn)MTF（調(diào)制傳遞函數(shù)）
10×物鏡中心偏差≤0.5μm
聚焦失靈處理
故障現(xiàn)象 原因 解決方案
AF反復(fù)掃描不停止 樣本對比度過低 染色/調(diào)節(jié)虹彩光圈
焦點(diǎn)周期性抖動 環(huán)境振動>5Hz 啟用防振臺（≥200kg）
Z軸定位偏差＞3μm 線性編碼器污染 用無塵布蘸乙醇清潔導(dǎo)軌
? 四、各品牌關(guān)鍵差異
功能 奧林巴斯 蔡司 舜宇
最快AF速度0.3秒（IXplore）0.25秒（Axio） 0.8秒（NE900）
熒光AF通道支持4色激光 支持6色激光 支持3色LED
特色技術(shù) TruFocus溫度補(bǔ)償Definite Focus防漂 SmartStep多算法
?? 操作黃金法則
浸沒液禁忌：
水鏡勿用油，油鏡禁用水，否則球差增大3倍！
環(huán)境控制：
溫度波動≤1℃/h，濕度50%±5%（防止透鏡結(jié)露）
數(shù)據(jù)可靠性：
每日使用前用標(biāo)準(zhǔn)微球（如NIST SRM 1960）驗(yàn)證Z軸重復(fù)性（RSD＜0.8%）
當(dāng)自動聚焦失效時(shí)，立即切換手動模式并檢查：
物鏡螺紋是否松動 → 擰緊扭矩0.4N·m
樣本是否超出物鏡工作距離 → 油鏡WD=0.13mm
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心