麗春紅染色液 Ponceau S Solution:蛋白質(zhì)檢測的直觀分析試劑
染色操作流程:在蛋白質(zhì)成功轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜(NC 膜)或聚偏二氟乙烯膜(PVDF 膜)后,將膜從轉(zhuǎn)印裝置中取出,放入含有麗春紅染色液的容器中,確保膜沒在染色液中 。室溫下輕輕振蕩染色 1 - 5 分鐘,期間可觀察膜上蛋白質(zhì)條帶的顯色情況。當(dāng)條帶清晰可見時,取出膜用 TBS 或 PBS 洗滌 3 - 5 次,每次 5 - 10 分鐘,直至背景顏色基本褪去,僅留下清晰的蛋白質(zhì)紅色條帶 。此時,科研人員可對膜進(jìn)行拍照記錄,分析蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印效果,如條帶是否完整、有無拖尾、不同樣本間蛋白質(zhì)表達(dá)量的差異等。
后續(xù)實驗銜接:在完成麗春紅染色和拍照記錄后,將膜放入封閉液中,按照常規(guī) Western Blot 實驗流程進(jìn)行封閉、一抗孵育、二抗孵育及檢測等步驟 。由于麗春紅已被充分洗脫,不會對后續(xù)抗體結(jié)合和檢測產(chǎn)生影響,可順利完成整個 Western Blot 實驗,實現(xiàn)對目標(biāo)蛋白質(zhì)的定性和定量分析 。
染色時間控制:染色時間需根據(jù)膜的類型、蛋白質(zhì)含量和染色液濃度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。對于蛋白質(zhì)含量較高的樣本或染色液濃度較高時,染色時間可適當(dāng)縮短,避免染色過度導(dǎo)致條帶模糊;對于蛋白質(zhì)含量較低的樣本,可適當(dāng)延長染色時間,但不宜過長,以防背景顏色過深影響結(jié)果觀察 。
洗滌效果保證:在洗滌過程中,需確保充分洗滌以去除膜上的麗春紅 S。若洗滌不充分,殘留的麗春紅可能會干擾后續(xù)抗體結(jié)合,導(dǎo)致背景信號升高或出現(xiàn)非特異性條帶 。每次洗滌時,應(yīng)保證足夠的洗滌時間和洗滌液用量,并輕輕振蕩,使洗滌液充分接觸膜的表面。
染色液儲存與使用:麗春紅染色液應(yīng)儲存于室溫避光處,避免高溫、光照和潮濕環(huán)境,防止染料分解失效 。使用前需檢查染色液是否出現(xiàn)渾濁、變色等異常現(xiàn)象,若有異常則不宜使用。開啟后的染色液應(yīng)盡快使用,避免長時間暴露在空氣中導(dǎo)致性能下降 。
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