5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）作為一種第六種 DNA 堿基，在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中具有功能，已在人類和小鼠大腦以及胚胎干細(xì)胞（ES）中被檢測(cè)到含量豐富。在哺乳動(dòng)物中，它可以通過 TET 家族的 5-mC-羥化酶介導(dǎo)的 5-mC 氧化反應(yīng)生成。5-hmC 已被證明具有組織特異性，在培養(yǎng)細(xì)胞系中幾乎無法檢測(cè)到，而在人類大腦組織中可達(dá) 0.6%，在某些其他物種中甚至可高達(dá)總 DNA 的 8%。5-hmC 作為一種重要的表觀遺傳修飾在表型和基因表達(dá)中的生物學(xué)意義已逐漸被認(rèn)可。例如，幾乎所有癌癥中都表現(xiàn)出全球 5-hmC 含量的降低（DNA 低甲基化），并被提議作為癌癥的分子標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

MethylFlash 全球 DNA 羥甲基化（5-hmC）ELISA 簡易試劑盒（比色法） 是一套經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液和試劑組合，通過特異性檢測(cè) 5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）水平，以比色法定量檢測(cè)全球 DNA 羥甲基化狀態(tài)。該試劑盒采用 EpigenTek 流行的全球 DNA 甲基化技術(shù)的第四代技術(shù)，進(jìn)一步改進(jìn)了前代 MethylFlash 試劑盒，提高了速度、簡便性、靈敏度和可重復(fù)性。

本試劑盒還特別優(yōu)化為與 MethylFlash™ 全球 DNA 甲基化（5-mC）ELISA 簡易試劑盒（比色法） 配對(duì)使用，可同時(shí)定量檢測(cè)甲基化 DNA 和羥甲基化 DNA。

艾美捷MethylFlash全球DNA羥甲基化（5-hmC）極速分析試劑盒（比色法）（#P-1032-48）優(yōu)勢(shì)與特點(diǎn)：

快速：步驟精簡，整個(gè)過程僅需 2 小時(shí)。

穩(wěn)健：改進(jìn)的試劑盒配方使檢測(cè)具有更大的“信號(hào)窗口”，減少了復(fù)孔之間的變異。

便捷：背景噪聲低，無需 DNA 變性或平板封閉步驟。

靈敏：z低可檢測(cè) 100 ng 輸入 DNA 中 0.01% 的羥甲基化 DNA。

特異：對(duì) 5-hmC 具有高特異性，在樣本 DNA 的指示濃度范圍內(nèi)不與未甲基化胞嘧啶或甲基化胞嘧啶發(fā)生交叉反應(yīng)。

通用：包含陽性和陰性對(duì)照，可檢測(cè)任何物種的單鏈或雙鏈輸入 DNA 中的 DNA 羥甲基化。

準(zhǔn)確：優(yōu)化的陽性對(duì)照可以按百分比比例化，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確，并與 HPLC-MS 分析高度可比。

靈活：條孔微孔板格式，適用于手動(dòng)或高通量分析。

注：基于單一樣本的雙復(fù)孔檢測(cè)。  

原理與流程：

本試劑盒包含定量檢測(cè)全球 DNA 羥甲基化所需的全部試劑。在檢測(cè)中，DNA 被固定在經(jīng)過特殊處理、具有高 DNA 親和力的條孔中。使用基于 5-hmC 單克隆抗體（mAb）的檢測(cè)復(fù)合物一步法檢測(cè)羥甲基化 DNA，然后通過微孔板光譜光度計(jì)讀取吸光度進(jìn)行比色定量。羥甲基化 DNA 的百分比與測(cè)量的 OD 強(qiáng)度成正比。

起始材料：

輸入 DNA 應(yīng)相對(duì)純凈，260/280 比值 >1.6，可用水或 TE 緩沖液稀釋。每反應(yīng)的 DNA 用量范圍為 20 ng 至 200 ng。然而，我們推薦使用 100 ng DNA，這是獲得最佳結(jié)果的優(yōu)化輸入量。

文獻(xiàn)引用：

Aguilera M et. al. (May 2025). Altered Ten Eleven Translocation Methylcytosine Dioxygenase Expression and DNA Hydroxymethylation in a Mouse Model of Prostate Cancer. Prostate.

Im H et. al. (April 2025). Epigenetic and Gene Expression Responses of Daphnia magna to Polyethylene and Polystyrene Microplastics. Molecules. 30(7)

Im H et. al. (April 2025). Epigenetic and Gene Expression Responses of Daphnia magna to Polyethylene and Polystyrene Microplastics. Molecules. 30(7)