液體培養(yǎng)法

將菌種接種到合適的液體培養(yǎng)基（如 LB 肉湯）中，在適宜條件下振蕩培養(yǎng)，當(dāng)菌液 OD600 達(dá)到 0.6 - 1.0 左右（不同菌種略有差異），即菌體處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期時(shí)，可用于保藏。此階段的菌體生長(zhǎng)狀態(tài)良好，保藏成功率更高。

03 菌液與甘油混合

將制備好的濃菌懸液或?qū)?shù)期菌液與無菌的50%甘油溶液混合，使最終甘油濃度保持在15% - 20% (v/v) 。例如，取0.6mL 50%甘油與1.4mL菌液混合，可得到2mL含15%甘油的菌懸液；取0.8mL 50%甘油和1.2mL菌液混合，則可獲得2mL含20%甘油的菌懸液?；旌蠒r(shí)需輕柔地上下顛倒或渦旋，確保菌液與甘油充分混勻。

04 分裝與標(biāo)記

迅速將混合均勻的菌液-甘油混合物分裝到無菌的冷凍保存管中，每管分裝 0.5 - 1.0mL 。同時(shí)，在管壁和管蓋上清晰標(biāo)明菌株名稱 / 編號(hào)、保存日期、甘油濃度、操作者姓名等信息，以便后續(xù)準(zhǔn)確取用和管理。

愛津生物提供多規(guī)格的凍存管，全部采用進(jìn)口醫(yī)療級(jí)聚丙烯（PP）材質(zhì)，具有高透明度、無毒無味，同時(shí)具備優(yōu)異的密封性和耐化學(xué)性。它不僅能承受121℃/15psi的高溫高壓滅菌，還能在-196℃至121℃的溫度范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，確保實(shí)驗(yàn)安全使用。

05 冷凍保存

可先將凍存管放入-20°C冰箱預(yù)冷1-2小時(shí)，隨后轉(zhuǎn)移至-80°C超低溫冰箱進(jìn)行速凍；也可使用專門的程序降溫盒（如Mr. Frosty）。需避免緩慢冷凍（如在-20°C直接凍存過夜），因?yàn)榫徛鋬鰰?huì)形成較大冰晶，對(duì)細(xì)胞造成損傷。若需長(zhǎng)期保存，可將凍存管置于液氮?dú)庀喹h(huán)境中，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

PART 03

菌種復(fù)蘇

01 快速解凍

從-80°C冰箱取出目標(biāo)凍存管后，立即放入37°C水?。ɑ蜻m合菌種生長(zhǎng)溫度的水?。┲?，輕輕搖晃，使冰晶在30秒到1分鐘內(nèi)融化。避免室溫緩慢融化，以防活性降低。

02 消毒與接種

用70%酒精擦拭凍存管外壁進(jìn)行消毒，在無菌環(huán)境下打開管蓋，使用無菌吸頭或接種環(huán)取少量解凍菌液（通常1-2環(huán)或10-50μL），劃線接種到合適的固體平板培養(yǎng)基上，然后在適宜條件下培養(yǎng)。需注意的是，解凍后的菌液不宜再次冷凍，每次使用需取新凍存管，以保證菌種質(zhì)量。

PART 04

注意事項(xiàng)

01 嚴(yán)格無菌操作

無菌操作是保藏成功的關(guān)鍵，任何環(huán)節(jié)的污染都可能導(dǎo)致保藏失敗。

02控制甘油濃度

15%-20%是常用的甘油濃度范圍，但不同菌株可能需要優(yōu)化。濃度過低，保護(hù)效果不足；濃度過高（超過25%），可能導(dǎo)致細(xì)胞因滲透壓失衡而脫水。

03 選擇合適的菌齡

務(wù)必使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期的健康菌體，衰老期的細(xì)胞存貨率較低，會(huì)影響保藏效果。

04 把控冷凍解凍速度

快速冷凍（-80℃直接凍或程序降溫）和快速解凍能夠顯著提高菌種存活率，緩慢操作會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可逆的損傷。

05 穩(wěn)定保存環(huán)境

-80℃是標(biāo)準(zhǔn)保存溫度，應(yīng)盡量減少冰箱開關(guān)次數(shù)，避免溫度波動(dòng)。若條件允許，液氮保存效果更佳，但成本相對(duì)較高。

06 考慮菌株特性

并非所有微生物都適合甘油保藏，部分對(duì)低溫或滲透壓敏感的菌株（如某些古菌、專性厭氧菌、部分病原菌），需要采用特殊方法或保護(hù)劑，并嚴(yán)格遵守生物安全規(guī)定，在相應(yīng)級(jí)別的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。

PART 05

高質(zhì)量保藏，從耗材選擇開始

菌種保藏不僅考驗(yàn)操作規(guī)范性，也依賴于高品質(zhì)的實(shí)驗(yàn)耗材。凍存管、移液吸頭、試劑瓶等耗材的性能，將直接影響菌種的活性與后續(xù)實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。

自2009年成立以來，愛津生物專注于實(shí)驗(yàn)室耗材研發(fā)與生產(chǎn)！目前產(chǎn)品體系已涵蓋900余種品類，全面覆蓋菌種保存、分子實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)等科研場(chǎng)景，持續(xù)為全球科研機(jī)構(gòu)提供穩(wěn)定可靠的實(shí)驗(yàn)耗材整體解決方案。

Company Profile

關(guān) 于 愛 津

愛津生物，成立于2009年

致力于研發(fā)生產(chǎn)生物科研領(lǐng)域所需的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品

專注生命科學(xué)、生物工程技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室耗材

堅(jiān)持不斷優(yōu)化、品質(zhì)至上的原則，將更值得信賴的產(chǎn)品交付于您
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