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食品標(biāo)準(zhǔn)更新速遞 | 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定

來(lái)源：艾杰爾飛諾美 2025年07月18日 15:11

乳鐵蛋白（Lactoferrin, LF）是轉(zhuǎn)鐵蛋白家族中的一種鐵結(jié)合糖蛋白，乳鐵蛋白存在于人體的乳汁和各種分泌液中，在母乳中含量最高，初乳中含量非常高的核心免疫功能蛋白。它能與病原微生物競(jìng)爭(zhēng)鐵源，抵御病原微生物侵襲，從而保護(hù)嬰幼兒免疫損傷。

1939年，科學(xué)家從牛奶中分離出紅色蛋白，但直到1961年人乳中的鐵結(jié)合蛋白才被提取，至此乳鐵蛋白才開(kāi)始進(jìn)入大眾視野。隨著研究的深入，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)母乳和牛乳中的乳鐵蛋白具有相似的生物活性，氨基酸序列同源性達(dá)到69%，但是牛乳中乳鐵蛋白含量卻顯著低于母乳。隨著生物科技的進(jìn)步，全球乳企開(kāi)始研發(fā)加速，將被譽(yù)為“免疫乳黃金”的乳鐵蛋白應(yīng)用于嬰幼兒配方奶粉中，為嬰兒的成長(zhǎng)保駕護(hù)航。

乳鐵蛋白卡通圖片

GB5009.299-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定中明確規(guī)定了乳鐵蛋白項(xiàng)目檢測(cè)的基質(zhì)，原理，前處理和分析耗材細(xì)節(jié)等。艾杰爾飛諾美 MDS實(shí)驗(yàn)室依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，提供了完整的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案。

前處理方法

?稱(chēng)量：稱(chēng)取5g（精確至0.01g）試樣于燒杯中，加標(biāo)

?提取：加入適量磷酸鹽緩沖液Ⅱ提取，分次將樣品轉(zhuǎn)移至 25mL 容量瓶，用磷酸鹽緩沖液Ⅱ 定容至刻度，充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管，在4 ℃條件下 10000r/min 離心 8min，取樣液 10mL 待凈化；

?活化：肝素親和柱使用前先將柱中保護(hù)液放掉，后加入 5.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化；

?上樣：準(zhǔn)確將 10.0mL樣液過(guò)柱，控制流速在 1mL/min~3mL/min；

?淋洗：用 10.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ淋洗，棄去流出液，用吸水紙擦拭干凈柱管內(nèi)壁殘留液體；

?洗脫：5.0mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ洗脫，不要抽干；

?濃縮：收集洗脫液并用磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至 5.00mL，過(guò)0.45μm PES水相針頭濾膜，上機(jī)待測(cè)。

色譜條件

?色譜柱：Jupiter C4 4.6×250mm 5µm 300?（00G-4167-E0）

?流動(dòng)相：A：0.1%三氟乙-酸水溶液；B：乙腈；

?流速：1.0 mL/min；

?柱溫：30 ℃；

?進(jìn)樣量：50 μL；

?梯度程序見(jiàn)下表：

注意：

• 肝素親和柱使用前要恢復(fù)至室溫（25℃）。

• 在吸取帶凈化液時(shí)不要吸取上層脂質(zhì)及下層沉淀，以免過(guò)柱時(shí)堵塞小柱。

• 標(biāo)準(zhǔn)用鹽為無(wú)水磷酸氫二鈉，水合鹽用量需要進(jìn)行換算。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

牛乳鐵蛋白標(biāo)曲圖

牛乳鐵蛋白加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品圖（20μg/mL）

巴氏殺菌乳基質(zhì)牛乳鐵蛋白圖（20μg/mL）

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)了GB5009.299-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定，使用肝素親和柱結(jié)合液相色譜的檢測(cè)方法對(duì)巴氏殺菌乳（巴氏奶）基質(zhì)進(jìn)行了乳鐵蛋白的測(cè)試。樣品經(jīng)磷酸鹽緩沖液Ⅱ提取后，肝素親和柱（12mL，柱容量≥2mg；貨號(hào)：PNBAC50020-12）凈化，Jupiter C4,4.6×250mm 5μm 300? (00G-4167-E0)液相色譜柱進(jìn)行檢測(cè)，采用外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，添加水平的相對(duì)回收率為96.95%，RSD1.5%，能夠滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

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