苯丙氨酸解氨酶（PAL）檢測試劑盒（苯丙氨酸比色法）

產(chǎn)品貨號：BA1566

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

苯丙氨酸解氨酶( L－phenylalanine ammonia-lyase，PAL)是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶，該酶多存在于高等植物、酵母、菌類可溶性部分物質(zhì)，是1961年J.Koukol在大麥中發(fā)現(xiàn)的，推測其分子量約為30萬，這是一個(gè)可把苯丙氨酸用于酚類化合物合成的酶。在組織中的活性可隨外界因素而發(fā)生顯著變化，用光照、病傷害、植物激素處理等會(huì)使活性顯著增加，在多數(shù)情況下在組織中活性增加時(shí)，酶發(fā)生失活作用，這

時(shí)組織中具有活性酶的量很快就會(huì)減少，據(jù)認(rèn)為這種失活是與類蛋白質(zhì)物質(zhì)作用有關(guān)，測定細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間代謝物及關(guān)鍵酶活性，可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

尚寶苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測試劑盒(苯丙氨酸比色法)測原理是以苯丙氨酸作為底物，在酶促反應(yīng)的件下采用每隔一定時(shí)間測定產(chǎn)物生成量的方法，于分光光度計(jì)290nm處檢測吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算，該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的苯丙氨酸解氨酶活性，尤其適用于檢測水果中苯丙氨酸解氨酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 研缽或勻漿器

3. 離心管或試管

4. 低溫離心機(jī)

5. 水浴鍋或恒溫箱

6. 比色杯

7. 分光光度計(jì)

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取2g植物組織或水果中層果肉，加入5ml PAL Lysis buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的苯丙氨酸解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL Lysis buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2. PAL加樣：按照下表設(shè)置對照管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測能設(shè)置2平行管，求平均值。

3. PAL測定：以對照管為對照(調(diào)零)，比色杯光徑1.0cm，分光光度計(jì)立即測定290nm處測定管的吸光度(記為A_{測定 0} )。40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入0.1ml PAL終止液終止反應(yīng)(備選方案)，以對照管為對照(調(diào)零)，分光光度計(jì)立即測定 290nm處測定管的吸光度(記為A_測定1 )。注意：加入PAL終止液終止反應(yīng)不是必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對照管為對照(調(diào)零)，比色杯光徑1.0cm，分光光度計(jì)立即測定290nm處測定管的吸光度(記為A_測定1 )。

計(jì)算：

PAL活性單位的定義：在該實(shí)驗(yàn)條件下，每小時(shí)吸光度變化0.01所需酶量為一個(gè)活性單位。

組織樣品PAL(U)={(A_測定1 -A_測定0 )×V _T }/(W×V_S ×0.01×t)

式中：A_測定1 =40℃孵育1h后測定管的吸光度

A_測定0 =加入PAL Assay buffer后立即檢測的測定管吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V_T =提取酶液的總體積(ml)

V_S =測定時(shí)所用酶液體積(ml)

t=反應(yīng)時(shí)間(h)=1

液體樣品PAL(U)=(A_測定1-A_測定0 )/(0.01×t)

式中：A_測定1 =40℃孵育1h后測定管的吸光度

A_測定0 =加入PAL Assay buffer后立即檢測的測定管吸光度

t=反應(yīng)時(shí)間(h)=1

注意事項(xiàng) ：

1. 待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2. 獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測，亦可-20℃保存。

3. 如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)注意酶標(biāo)儀的檢測體積。

4. 每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。