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常見細(xì)胞培養(yǎng)問題溯源：如何判斷是培養(yǎng)基問題？
細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基質(zhì)量直接影響細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。若出現(xiàn)細(xì)胞貼壁率低、增殖緩慢、形態(tài)異常或死亡等現(xiàn)象，可通過以下步驟系統(tǒng)排查是否由培養(yǎng)基問題導(dǎo)致：
1.基礎(chǔ)成分驗(yàn)證
核心成分缺失：檢查培養(yǎng)基是否含必需氨基酸（如谷氨酰胺）、維生素（如維生素B12）、無機(jī)鹽（如鈣、鎂）及葡萄糖。例如，DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基需額外添加10%胎牛血清（FBS）提供生長(zhǎng)因子，若未補(bǔ)充會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞代謝停滯。
pH與滲透壓異常：正常培養(yǎng)基pH應(yīng)為7.2-7.4，滲透壓280-320mOsm/kg。使用pH試紙或滲透壓儀檢測(cè)，若偏離范圍會(huì)破壞細(xì)胞膜穩(wěn)定性，引發(fā)死亡。
2.污染與降解排查
微生物污染：觀察培養(yǎng)基是否渾濁、有沉淀或異味。支原體污染（無可見癥狀）需通過PCR檢測(cè)或熒光染色確認(rèn)，其會(huì)競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。
氧化降解：培養(yǎng)基中的谷氨酰胺易分解產(chǎn)生氨，積累至2mM即可毒害細(xì)胞。若培養(yǎng)基呈黃色（酚紅指示劑變色）或聞及氨味，需立即更換。
3.批次與儲(chǔ)存問題
批次差異：同一品牌不同批次培養(yǎng)基可能因原料純度波動(dòng)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。建議保留舊批次作為對(duì)照，若新批次導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)下降，需聯(lián)系供應(yīng)商提供質(zhì)檢報(bào)告。
儲(chǔ)存條件：未開封培養(yǎng)基應(yīng)避光保存于2-8℃，開封后需分裝并于4周內(nèi)用完。反復(fù)凍融會(huì)破壞血清中的生長(zhǎng)因子，導(dǎo)致細(xì)胞貼壁失敗。
4.對(duì)照實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
平行培養(yǎng)：設(shè)置對(duì)照組（使用已知正常的培養(yǎng)基）與實(shí)驗(yàn)組（問題培養(yǎng)基），觀察細(xì)胞生長(zhǎng)差異。若對(duì)照組細(xì)胞正常增殖而實(shí)驗(yàn)組停滯，可確認(rèn)培養(yǎng)基問題。
成分替換：逐步替換培養(yǎng)基中的血清、抗生素等添加劑，定位具體污染或降解成分。
通過系統(tǒng)排查成分、污染、批次及儲(chǔ)存環(huán)節(jié)，可快速鎖定培養(yǎng)基問題根源，保障細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定性。
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