ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)中,如果標(biāo)準(zhǔn)品顯色但樣本不顯色,可能由以下幾個原因造成:
1. 樣本保存或處理不當(dāng):如果樣本在保存或處理過程中發(fā)生了降解,或者樣本中待檢測的抗原濃度過低,都可能導(dǎo)致樣本不顯色。
2. 抗體特異性或濃度問題:使用的捕獲抗體和檢測抗體可能與樣本中的抗原不匹配,或者抗體濃度不足,導(dǎo)致特異性結(jié)合不充分。
3. 孵育條件不適宜:孵育溫度、時間或緩沖液條件不適當(dāng),可能影響抗原抗體的結(jié)合效率。
4. 封閉不充分或封閉液問題:封閉步驟如果未充分進(jìn)行,可能會導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加,從而掩蓋了特異性信號。
5. 顯色時間不足:標(biāo)準(zhǔn)品顯色時間可能比樣本所需時間長,如果樣本孔的顯色時間不夠,也可能導(dǎo)致不顯色。
6. 終止液問題:加入終止液后,如果終止液不正確,可能提前終止了顯色反應(yīng),導(dǎo)致樣本孔不顯色。
7. 顯色劑保存不當(dāng):如果顯色劑如TMB在使用前已經(jīng)變色或氧化,會影響最終的顯色效果。
8. 儀器讀數(shù)問題:酶標(biāo)儀的波長設(shè)置、濾光片選擇或儀器本身的問題,可能影響到樣本孔的讀數(shù)。
解決方法:
1. 檢查樣本保存和處理過程,確保樣本未降解且抗原濃度足夠。
2. 驗證抗體的特異性及濃度,必要時更換抗體。
3. 確保孵育條件符合說明書要求。
4. 仔細(xì)執(zhí)行封閉步驟,如果封閉不充分,嘗試增加封閉時間或調(diào)整封閉液的濃度。
5. 確認(rèn)顯色時間,確保樣本孔達(dá)到顯色的峰值。
6. 使用正確的終止液,并在加入終止液后立即讀數(shù)。
7. 檢查顯色劑的保存條件,確保其未被氧化。
8. 核對酶標(biāo)儀的設(shè)置,確保波長和濾光片選擇正確,并考慮儀器校準(zhǔn)。
9. 如果是新試劑或新操作,可以嘗試對照標(biāo)準(zhǔn)品操作,看是否能重現(xiàn)顯色,從而排除操作步驟中的問題。
通過上述步驟,可以排查并解決樣本不顯色的問題。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。