ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域中的免疫分析技術(shù)。它通過(guò)抗原或抗體與固相載體的結(jié)合，以及酶標(biāo)記物的催化反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)特定分子的檢測(cè)和定量。

基本原理：

ELISA利用抗原或抗體的特異性結(jié)合，將它們固定在固相載體上（如96孔板），然后通過(guò)酶標(biāo)記的抗體與底物反應(yīng)產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)。這種方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)微量物質(zhì)的高靈敏度和高特異性檢測(cè)。

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）實(shí)驗(yàn)中，三個(gè)關(guān)鍵的必要試劑：

1. 包被抗體/抗原：這是試劑盒的“靈魂”所在。它們預(yù)先被固定在96孔板內(nèi)壁上，用作捕獲目標(biāo)抗原或抗體的錨點(diǎn)。這些抗原或抗體能夠特異性地結(jié)合樣品中的目標(biāo)分子。

2. 酶標(biāo)記抗體：這個(gè)試劑是實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè)的關(guān)鍵。它結(jié)合了高度特異性的抗體與具有催化活性的酶，如辣根過(guò)氧化物酶（HRP）。當(dāng)酶標(biāo)記抗體與孔板上的抗原或抗體結(jié)合后，酶會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顯色產(chǎn)物，從而實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大和檢測(cè)。

3. 底物溶液：底物是酶的反應(yīng)物，本身無(wú)色，但在酶的作用下會(huì)發(fā)生化學(xué)變化，生成有色產(chǎn)物。這個(gè)顯色反應(yīng)的深度與樣品中目標(biāo)分子的濃度成正比，因此通過(guò)測(cè)量顯色的深淺，可以定量分析目標(biāo)分子的含量。常用的底物包括TMB（四甲基聯(lián)苯胺）和ABTS（2,2'聯(lián)氮雙(3乙基苯并噻唑啉6磺酸)），它們?cè)诖呋髸?huì)形成藍(lán)色或橙黃色產(chǎn)物。