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在樣品進(jìn)入色譜柱保護(hù)柱之前，先流經(jīng)保護(hù)柱。保護(hù)柱內(nèi)填充有特定的吸附劑，這些吸附劑對(duì)樣品中的雜質(zhì)具有選擇性吸附作用。例如，在高效液相色譜(HPLC)中，如果樣品含有蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)，保護(hù)柱中的吸附劑可以通過(guò)疏水相互作用、靜電引力等方式將這些大分子吸附在保護(hù)柱內(nèi)，而讓目標(biāo)小分子化合物順利通過(guò)，從而防止這些大分子雜質(zhì)進(jìn)入色譜柱污染固定相。
樣品中可能存在的微小顆粒雜質(zhì)也是色譜柱的一大威脅。保護(hù)柱可以起到過(guò)濾的作用，其內(nèi)部的多孔結(jié)構(gòu)或?yàn)V膜能夠阻擋這些顆粒，避免它們堵塞色譜柱的入口或在柱內(nèi)積累。當(dāng)樣品溶液通過(guò)保護(hù)柱時(shí)，顆粒被截留在保護(hù)柱中，保證了進(jìn)入色譜柱的樣品是相對(duì)清潔的，維持了色譜柱內(nèi)流體的順暢流動(dòng)，有助于保持良好的色譜分離效果。
色譜柱保護(hù)柱的使用注意事項(xiàng)：
1.安裝方面
-接口平整：保護(hù)柱的接口應(yīng)盡可能保證平整，避免劃傷，防止出現(xiàn)泄漏或損壞接口。
-連接緊密且合理：獨(dú)立式保護(hù)柱與分析柱連接時(shí)，連接管路盡可能短，且接口切面平滑，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應(yīng)?？ㄌ资奖Ｗo(hù)柱一般未標(biāo)注液流方向，使用時(shí)建議自行標(biāo)注，并按照標(biāo)注方向來(lái)使用，以免正反向使用后，截留的雜質(zhì)污染分析柱。
2.使用過(guò)程
-專柱專用：避免保護(hù)柱成為不同項(xiàng)目的交叉污染源，不同的分析項(xiàng)目盡量使用專用的保護(hù)柱。
-控制壓力與流速：避免過(guò)高及過(guò)大的壓力變化，采用較小的流速或流速梯度的方法來(lái)控制柱壓，延長(zhǎng)保護(hù)柱和分析柱的使用壽命。一般來(lái)說(shuō)，柱壓突然升高可能意味著保護(hù)柱或分析柱堵塞，需要及時(shí)處理。
-注意流動(dòng)相兼容性：確保保護(hù)柱材料與使用的流動(dòng)相兼容，特別是當(dāng)流動(dòng)相含有乙腈等可能降解材料的溶劑時(shí)。同時(shí)，要注意流動(dòng)相的純度，避免微量不溶性雜質(zhì)顆粒進(jìn)入保護(hù)柱造成堵塞。
-樣品凈化：在進(jìn)樣前，盡可能對(duì)樣品進(jìn)行分離提純，以除去對(duì)色譜柱有害的雜質(zhì)，減少保護(hù)柱的負(fù)擔(dān)。
-避免反沖：通常情況下，色譜柱包括保護(hù)柱不應(yīng)進(jìn)行反沖，除非色譜柱的使用說(shuō)明書(shū)明確標(biāo)明可以進(jìn)行反沖來(lái)去除柱頭上的雜質(zhì)，否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
3.維護(hù)與更換
-定期清洗：根據(jù)使用情況，定期用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑幢Ｗo(hù)柱，如反相柱可用水、甲醇、乙腈等依次沖洗，再以相反順序依次沖洗，但要注意溶劑的過(guò)渡應(yīng)逐漸進(jìn)行，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)為柱體積的20倍左右。
-正確保存：使用完保護(hù)柱后，用適宜的溶劑(如乙腈或甲醇)沖洗至基線平衡，并將柱內(nèi)充滿該溶劑，擰緊柱接頭，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液長(zhǎng)時(shí)間保留在保護(hù)柱內(nèi)。
-及時(shí)更換：當(dāng)保護(hù)柱的性能下降到一定程度，如柱壓升高、峰型變差、分離度降低等，應(yīng)及時(shí)更換，以保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和分析柱的正常使用。
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