細(xì)胞凍存是保存細(xì)胞的重要手段,通過低溫來延緩細(xì)胞的生命活動(dòng)。這種技術(shù)使細(xì)胞能夠得以保存,在需要的時(shí)候,又可以被復(fù)蘇用于各種實(shí)驗(yàn)。

19世紀(jì)末,科學(xué)家開始研究低溫對生物組織的影響。早期的實(shí)驗(yàn)表明,單純冷凍會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞冰晶形成和滲透壓失衡而死亡。1937年,Luyet和Hodapp提出“冰晶損傷”理論,為后續(xù)冷凍保護(hù)研究奠定了基礎(chǔ)。1949年,英國科學(xué)家在研究精子冷凍時(shí),偶然發(fā)現(xiàn)甘油能顯著提高冷凍后精子的存活率。甘油是一種滲透性冷凍保護(hù)劑(CPA),可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,降低冰點(diǎn)并減少冰晶形成。它通過平衡細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓,防止細(xì)胞在冷凍過程中因脫水而破裂。1959年,科學(xué)家發(fā)現(xiàn)二甲基亞砜(DMSO)同樣具有優(yōu)異的冷凍保護(hù)效果,尤其適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。DMSO比甘油更易穿透細(xì)胞膜,且毒性較低,迅速成為細(xì)胞凍存的標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)劑之一。1963年P(guān)eter Mazur提出冷凍損傷的“兩因素假說”:快速冷凍時(shí),細(xì)胞內(nèi)冰晶形成,破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞器;慢速冷凍時(shí),細(xì)胞外冰晶形成導(dǎo)致細(xì)胞脫水,胞內(nèi)溶質(zhì)濃度升高,造成化學(xué)毒性。該理論為程序化慢凍法提供了科學(xué)依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)過程中,大多數(shù)細(xì)胞的凍存遵循“慢速凍存”的原則,通過程序降溫盒或程序化冷凍儀,控制降溫速率(通常為1°C/min),使細(xì)胞在冷凍過程中逐步脫水,避免細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。該方法顯著提高了凍存細(xì)胞的存活率。
研究表明5%-10%的DMSO*適合細(xì)胞凍存,具體比例要根據(jù)細(xì)胞種類調(diào)整,對DMSO敏感的細(xì)胞則需要降低比例。根據(jù)小尚的經(jīng)驗(yàn),8% DMSO適用于大部分細(xì)胞系。同時(shí),還需根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)難度調(diào)整血清比例,越難養(yǎng)的細(xì)胞越要多加血清,過于脆弱的細(xì)胞可用血清+DMSO凍存,不加培養(yǎng)基。我們常用的凍存液配方是92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦)。

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尚恩非程序性細(xì)胞凍存液(無血清)是一種不含血清且不需要經(jīng)過程序降溫步驟的凍存液,可以重懸細(xì)胞后直接置于超低溫冰箱而無需逐步降溫或者程序性凍存盒,極大方便了細(xì)胞凍存操作,同時(shí)減少了血清對細(xì)胞 及實(shí)驗(yàn)的影響。
貨號:SNR-006

無論用何種凍存液,都建議做凍檢再正式凍存:即凍存24h后復(fù)蘇一支,確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)沒問題,即可進(jìn)行大批量凍存。凍檢成功前要留至少一瓶細(xì)胞培養(yǎng),以免復(fù)蘇失敗導(dǎo)致細(xì)胞絕種。


公司簡介SUNNCELL
武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖高新區(qū)光谷生物城,專注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù),公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實(shí)驗(yàn)室、動(dòng)物房,已通過GB/T19001-2016/ISO9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證,并獲得高新技術(shù)企業(yè)等多項(xiàng)榮譽(yù)。
公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系、原代細(xì)胞、胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、完*培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品,提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購服務(wù);細(xì)胞庫儲(chǔ)存細(xì)胞系700余種,同時(shí)通過不間斷引種細(xì)胞擴(kuò)大豐富細(xì)胞種類;公司還提供人源、小鼠源細(xì)胞系的STR鑒定,其他種屬細(xì)胞的種屬鑒定服務(wù),細(xì)胞標(biāo)志物檢測,污染檢測等細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
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