小鼠樹突細(xì)胞DC2.4復(fù)蘇與傳代及凍存操作說明!
細(xì)胞簡介
平臺編號:Bio-128988
規(guī)格:1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息:DC2.4
細(xì)胞名稱:小鼠樹突細(xì)胞DC2.4
產(chǎn)品規(guī)格:T25培養(yǎng)瓶x1;1.5ml凍存管x2
細(xì)胞數(shù)量:1x10^6;1x10^6
保存溫度:37℃;-198℃
運(yùn)輸方式:常溫保溫運(yùn)輸;干冰運(yùn)輸
安全等級:1
用途限制:僅供科研2類
培養(yǎng)體系:DMEM高糖培養(yǎng)基(Hyclone)+10%胎牛血清(Gibco)+1%雙抗(Hyclone)
培養(yǎng)溫度:37℃
二氧化碳濃度:5%
簡介:小鼠樹突細(xì)胞DC2.4取自C57BL/6小鼠
用途:細(xì)胞系
注意事項(xiàng):僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn))
細(xì)胞復(fù)蘇操作說明(針對凍存細(xì)胞)
實(shí)驗(yàn)儀器:超凈工作臺 ,CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,水浴鍋 ,離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,三抗
實(shí)驗(yàn)材料:T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,需復(fù)蘇的細(xì)胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、從液氮罐中取出凍存管 ,直接浸入 37℃溫水中 ,并不時(shí)搖動令其盡快融化。
2、從 37℃水浴中取出凍存管 ,打開蓋子 ,移液槍吸出細(xì)胞懸液 ,加到離心管并滴加 5 倍以上培養(yǎng)基并混勻。
3、操作離心 ,調(diào)至 1000 轉(zhuǎn)/分 ,時(shí)長 10 分鐘
4、棄去上清液 ,重懸離心管底部細(xì)胞沉淀 ,在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 培養(yǎng)基 ,計(jì)數(shù) ,調(diào)整細(xì)胞密度,接種培養(yǎng)瓶 ,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
5、次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。
6、注意:凍存細(xì)胞建議三管一起復(fù)蘇到一個 T25 培養(yǎng)瓶中
細(xì)胞傳代操作說明(貼壁細(xì)胞)
實(shí)驗(yàn)儀器:超凈工作臺 ,CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗
實(shí)驗(yàn)材料:T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,需傳代的細(xì)胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中 ,愈合度達(dá)到 80% ,可進(jìn)行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì),吸出培養(yǎng)基 ,并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍,添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ,消 化 2min(具體時(shí)間視細(xì)胞而定),后用培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ,棄上清 收集細(xì)胞,鋪至 2 個 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),各添加 7ml 培養(yǎng)基。
3、注意:消化時(shí)間不易過長,消化前血清成分務(wù)必去除干凈,終止消化請用新鮮培養(yǎng)基,原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用(終止消化或傳代)。
細(xì)胞傳代操作說明(懸浮細(xì)胞)
實(shí)驗(yàn)儀器:超凈工作臺 ,CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,三抗
實(shí)驗(yàn)材料:T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,需傳代的細(xì)胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中,密度達(dá)到懸浮細(xì)胞傳代標(biāo)準(zhǔn)(沉降后可鋪滿底面),可進(jìn)行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì),吹打均勻,吸出培養(yǎng)基,1000r/min 離心 10 min,棄上清收集細(xì)胞,鋪至 2 個T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),各添加 7ml 培養(yǎng)基。
3、注意:原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用(傳代)。
細(xì)胞凍存操作說明
實(shí)驗(yàn)儀器:超凈工作臺 ,CO2 培養(yǎng)箱 ,倒置顯微鏡 ,離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑:DMEM 培養(yǎng)基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗 ,DMSO
實(shí)驗(yàn)材料:T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,需凍存的細(xì)胞 ,移液槍 ,槍頭 ,離心管 ,凍存管 ,記號筆
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、取待凍存的細(xì)胞(按 T25 計(jì) )用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ,用培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ,棄上清收集細(xì)胞。如果是懸浮生長的細(xì)胞 ,則可直接離心收集細(xì)胞。
2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細(xì)胞懸液。
3、細(xì)胞懸液裝入 3 支凍存管中。
4、凍存管在 4℃下存放 30 min ,轉(zhuǎn)放-20℃ 1.5~2 h ,再轉(zhuǎn)人-70℃ 4-12 h 后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(- 196℃) ,并登記。
驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng)
1、收到小鼠樹突細(xì)胞DC2.4,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快聯(lián)系。
2、收到小鼠樹突細(xì)胞DC2.4,如包裝完好,請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理。
3、收到小鼠樹突細(xì)胞DC2.4后,請鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請離心收集細(xì)胞,接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí)血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右,血清濃度還是在10%。
4、收到小鼠樹突細(xì)胞DC2.4時(shí)如無異常情況,請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時(shí),請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
6、24小時(shí)后,小鼠樹突細(xì)胞DC2.4已恢復(fù)并貼滿瓶壁,即可傳代。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘??梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
7、貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
特別提醒:原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用,請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù),對購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位,都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得優(yōu)質(zhì)服務(wù)!也正因?yàn)榇?,北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系!
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