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科研小白入門:快速了解無縫克隆試劑盒

來源:上海易匯生物科技有限公司   2025年07月23日 10:49  
在基因研究中,無縫克隆試劑盒是將特定基因片段準確連接到載體上的得力工具。對于科研小白,它的操作雖不復雜,但了解其原理和步驟很關鍵。
無縫克隆基于同源重組原理。通過特殊引物給目的基因兩端加上與線性化載體末端互補的 “特殊標簽”,再利用試劑盒里的重組酶,將二者精準連接,避免了傳統(tǒng)克隆中限制性內切酶的復雜操作 。
使用時,先設計引物,用 PCR 擴增出帶 “特殊標簽” 的目的基因片段,并純化。同時,根據載體特點,選擇酶切或 PCR 擴增的方式將其線性化并純化 。之后,按說明書將目的基因片段、線性化載體與試劑盒中的重組酶混合液、反應緩沖液配成反應體系,50℃孵育 30 分鐘 - 1 小時,完成連接 。接著把連接產物轉化到感受態(tài)細胞中,經培養(yǎng)篩選出陽性克隆,最后通過菌落 PCR、DNA 測序等驗證克隆是否成功 。
無縫克隆試劑盒優(yōu)勢明顯,克隆效率高,連接精準,能保留基因原始序列;適用多種載體和基因片段;操作簡單,無需復雜設備和技術,大大降低實驗門檻,助力科研小白快速開啟基因研究之旅。



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