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ELISA實驗常見問題分析與解決方案

來源:本生(天津)健康科技有限公司   2025年07月23日 15:29  

  ELISA實驗常見問題分析與解決方案

  一、顯色異常問題

  白板(無顯色)?

  原因?:試劑失活(如HRP污染或底物失效)、漏加關鍵組分(酶標抗體/顯色劑)、孵育溫度或時間不足?。

  解決?:更換新鮮試劑,檢查加樣步驟,確保37℃孵育1-2小時并避光?。

  高背景/非特異性顯色?

  原因?:封閉不充分(如BSA濃度不足)、洗滌不凈(殘留未結合物質)、抗體濃度過高或交叉反應?。

  解決?:優(yōu)化封閉條件(延長至1-2小時),增加洗滌次數(shù)(5次,每次1分鐘),調整抗體稀釋比例?。

  二、重復性差

  加樣誤差?:復孔間加樣量或時間不一致,導致CV%>20%?。

  洗板不均?:洗板機管道阻塞或手工洗板力度不一致?。

  解決方案?:使用同一移液器,規(guī)范加樣速度;檢查洗板機或手動充分拍干?。


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  三、假陽性/假陰性

  假陽性?

  溶血/細菌污染?:紅細胞釋放過氧化物酶或細菌內源性HRP干擾?。

  類風濕因子(RF)?:與IgG Fc段非特異性結合?。

  處理?:離心去除溶血樣本,添加RF阻斷劑?。

  假陰性?

  抗原降解?:反復凍融或保存時間過長?。

  競爭法操作錯誤?:如先加酶標抗體后加樣本?。

  處理?:分裝凍存樣本,嚴格按說明書順序加樣?。

  四、標準曲線異常

  標曲擬合差(R2<0.99)?:標準品稀釋錯誤或酶標儀波長設置不當?。

  批間差異?:不同批次試劑活性波動,可用校正因子“S”校準歷史數(shù)據(jù)?。

  五、關鍵操作注意事項

  加樣?:槍頭懸空加至孔底,避免觸碰孔壁或濺灑?。

  孵育?:覆蓋封板膜防止蒸發(fā),避免疊放導致溫度不均?。

  洗滌?:使用含0.05% Tween-20的洗滌液,拍干?。

  六、其他常見問題

  邊緣效應?:周邊孔顯色偏強,建議質控孔置于板中央?。

  酶標板選擇?:聚苯乙烯板需評估吸附性能,避免批次差異?。

  (注:具體問題需結合試劑盒說明書及實驗條件調整?。)

  注:以上資料僅供參考,不作為實驗數(shù)據(jù),具體請咨詢品牌供應商或技術老師;

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